Anticorpo policlonale Anti-MAD2/MAD2L1 per IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q13257

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di MAD2/MAD2L1

• MAD2L1 codifica la proteina MAD2A del checkpoint di assemblaggio del fuso mitotico (nota anche come proteina 1 simile a MAD2), un regolatore critico della fedeltà della segregazione cromosomica.
• MAD2L1 è un componente principale del complesso del checkpoint mitotico (MCC), che inibisce il complesso promuovente l'anafase/ciclosoma (APC/C) per ritardare la segregazione cromosomica finché tutti i cromosomi non sono correttamente attaccati al fuso mitotico. Riferimenti correlati: PMID:10700282 PMID:11804586 PMID:15024386
• Il MCC, composto da CDC20, MAD2L1/MAD2, BUB1B/BUBR1 e BUB3, funge da effettore chiave del checkpoint di assemblaggio del fuso. Riferimenti correlati: PMID:15020684 PMID:27509861
• L'APC/C legato al MCC rimane inattivo, impedendo la transizione da metafase ad anafase; il silenziamento del checkpoint innesca l'auto-ubiquitinazione mediata da UBCH10 di CDC20, portando alla riattivazione dell'APC/C. Riferimenti correlati: PMID:27509861
• MAD2L1 subisce un cambiamento conformazionale dinamico: il conformero chiuso (C-MAD2) forma un complesso con MAD1L1 ai cinetocori non attaccati, reclutando il MAD2 aperto (O-MAD2) e catalizzando la sua conversione in C-MAD2, amplificando così la segnalazione del checkpoint. Riferimenti correlati: PMID:29162720
• A livello subcellulare, MAD2L1 si localizza nel nucleo, ai cinetocori dei centromeri, ai poli del fuso e nel citoplasma, riflettendo le sue molteplici funzioni mitotiche.
• La proteina è soggetta ad acetilazione e fosforilazione, e lo splicing alternativo genera multiple isoforme; queste modifiche e varianti possono modulare l'attività del checkpoint e le interazioni proteiche.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde ai 205 amminoacidi N-terminali di MAD2L1 umano; si consiglia di verificare la specificità dell'isoforma e della specie nel proprio sistema di saggio, poiché può verificarsi reattività crociata con proteine strettamente correlate.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), i metodi di recupero dell'antigene e le condizioni di fissazione possono influenzare la colorazione; si raccomanda l'ottimizzazione utilizzando appropriati controlli positivi (es. tessuti mitotici) e negativi.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), ci si aspetta un'etichettatura dei cinetocori e dei poli del fuso durante la mitosi; la colorazione combinata con marcatori del centromero o della tubulina può aiutare a confermare il coinvolgimento del bersaglio.
• Per l'ELISA, la proteina ricombinante purificata MAD2L1 può fungere da controllo positivo; si consiglia la titolazione delle concentrazioni di anticorpo e antigene per stabilire rapporti segnale/rumore ottimali.
• Validare sempre l'anticorpo nei propri campioni specifici e nel contesto applicativo, poiché le prestazioni possono variare tra i tipi cellulari e le condizioni sperimentali.

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