Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-MAD2/MAD2L1 per WB, ELISA - Q13257

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Proteina del Checkpoint del Fuso Mitotico MAD2A

• MAD2L1 (MAD2A) è un componente cruciale del complesso del checkpoint mitotico (MCC), che inibisce il complesso promotore dell'anafase/ciclosoma (APC/C) per ritardare la segregazione cromosomica finché tutti i cromosomi non sono correttamente attaccati al fuso mitotico.
  Riferimenti correlati:
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• L'MCC è composto da CDC20, MAD2L1, BUB1B/BUBR1 e BUB3; il suo legame con APC/C mantiene il complesso in uno stato inattivo, prevenendo l'inizio prematuro dell'anafase.
  Riferimenti correlati:
  PMID:15020684
  PMID:27509861
• In seguito al silenziamento del checkpoint dell'assemblaggio del fuso, il complesso MCC-APC/C recluta l'enzima E2 UBCH10, portando all'auto-ubiquitinazione e degradazione di CDC20. Ciò riattiva APC/C, guidando la transizione metafase/anafase.
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• MAD2L1 assume due conformazioni distinte: aperta (O-MAD2) e chiusa (C-MAD2). La forma chiusa si assembla con MAD1L1 sui cinetocori non attaccati per creare un modello che catalizza la conversione di O-MAD2 in C-MAD2, amplificando il segnale del checkpoint.
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  PMID:29162720
• Lo splicing alternativo produce due isoforme (MAD2A e MAD2B); MAD2A (codificata da MAD2L1) è l'isoforma regolata mitoticamente, essenziale per la funzione del checkpoint del fuso.
• La proteina si localizza dinamicamente durante il ciclo cellulare: risiede nel citoplasma e nel nucleo durante l'interfase, si concentra ai cinetocori e ai poli del fuso durante la mitosi e viene rilocalizzata in seguito all'attivazione del checkpoint.
• Modificazioni post-traduzionali, inclusa acetilazione e fosforilazione, modulano finemente l'attività e le interazioni di MAD2L1. Il suo peso molecolare calcolato da UniProt è ~23.5 kDa, mentre i dati del prodotto indicano ~24 kDa.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno (aa 1-205) comprende la regione N-terminale critica per l'interazione con MAD1 e il cambio conformazionale. Questo design può consentire il rilevamento di entrambe le forme O-MAD2 e C-MAD2.
• Per il Western blot, prevedere una banda vicino a 24 kDa. Utilizzare cellule sincronizzate mitoticamente (es. trattate con nocodazolo) insieme a controlli in interfase per confermare la specificità.
• Le applicazioni ELISA possono sfruttare formati diretti o sandwich; considerare l'uso della proteina ricombinante MAD2L1 come standard.
• Si prevede che l'anticorpo reagisca in modo crociato con MAD2L1 di topo e ratto in base alla conservazione della sequenza; si raccomanda la validazione in lisati di tessuto o cellule appropriati.
• Per studi funzionali, combinare con protocolli di sincronizzazione cellulare per arricchire le popolazioni mitotiche e migliorare il rilevamento del segnale.

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