Anticorpo policlonale di coniglio anti-MAPK1/MAPK3 per WB, IF/ICC, ELISA - P28482 / P27361

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di MAPK1/MAPK3

• MAPK1 (ERK2, p42-MAPK) e MAPK3 (ERK1, p44-MAPK) sono le due chinasi prototipiche attivate da mitogeni della famiglia delle protein chinasi attivate da mitogeni (MAPK), che costituiscono il nucleo della conservata cascata di segnalazione MAPK/ERK.
• Dopo l'attivazione, MAPK1/3 fosforilano un'ampia gamma di substrati nucleari e citoplasmatici, inclusi fattori di trascrizione (ad es. ELK1, FOS), proteine del citoscheletro e altre chinasi, regolando la crescita, la proliferazione, la differenziazione, l'adesione e la sopravvivenza cellulare.
• MAPK1 fosforila specificamente GLI1 in risposta alla segnalazione di Smoothened, promuovendo la dissociazione di GLI1 da SUFU e la sua traslocazione nucleare, regolando così positivamente la via Hedgehog. Riferimenti correlati: PMID:35831023
• In condizioni di ipossia, MAPK1 fosforila la fosfoglicerato chinasi PGK1, indirizzandola ai mitocondri e sopprimendo la produzione di acetil-coenzima A a partire dal piruvato. Riferimenti correlati: PMID:26942675
• La chinasi si sposta tra citoplasma e nucleo, localizzandosi presso le adesioni focali, le caveole, il citoscheletro (inclusi centrosomi e fusi mitotici) e le strutture associate alla membrana, a seconda del contesto cellulare.
• L'attività chinasica di MAPK1 è strettamente regolata da eventi di fosforilazione e defosforilazione; funge da nodo centrale per la propagazione del segnale, fosforilando a sua volta chinasi a valle come RSK, MSK, MNK e le chinasi MAPKAP.
• Le modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione attivante dei residui di Thr e Tyr nel loop di attivazione, l'acetilazione e l'ubiquitinazione, che ne modulano la stabilità, la localizzazione e i partner di interazione.
• Il knockout o l'espressione e la segnalazione aberranti di MAPK1/3 sono implicati nel cancro, nei disturbi neurologici e in altre malattie; la chinasi è bersaglio delle interazioni ospite-virus.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo policlonale di coniglio è stato prodotto utilizzando un peptide sintetico corrispondente agli amminoacidi 200-300 di MAPK1 e MAPK3 umano (ERK2 ed ERK1); si prevede che riconosca entrambe le chinasi e possa rilevare più bande nel western blot a causa delle isoforme e delle forme fosforilate.
• Per il western blot, caricare 20-30 µg di lisato proteico totale e utilizzare controlli appropriati (ad es. cellule private del siero rispetto a cellule stimolate con fattori di crescita) per osservare l'attivazione di ERK. I pesi molecolari attesi variano da 36 a 43 kDa.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, fissare le cellule con paraformaldeide al 4% e permeabilizzarle con Triton X-100 allo 0,1%; si raccomanda un'incubazione dell'anticorpo primario per tutta la notte a 4°C. Convalidare la specificità della colorazione mediante blocco con peptide o knockdown con siRNA.
• Per l'ELISA, questo anticorpo policlonale può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevazione; le condizioni ottimali di rivestimento e rilevazione devono essere determinate empiricamente. Una coppia abbinata di anticorpi monoclonali può migliorare la sensibilità e la specificità.
• L'anticorpo presenta reattività crociata con MAPK1/MAPK3 di topo e ratto; tuttavia, eseguire una convalida specie-specifica nel proprio sistema sperimentale per confermare la reattività e il rapporto segnale/rumore.

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