Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-MCM5 per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P33992

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di MCM5

• MCM5 (CDC46/P1-CDC46) è il fattore di licenza della replicazione del DNA e un componente centrale del complesso MCM2-7, l'elicasi replicativa eucariotica essenziale per l'iniziazione e l'elongazione della replicazione del DNA una volta per ciclo cellulare. Riferimenti correlati: PMID:40940420

• Insieme a CDC45 e GINS, MCM5 forma l'elicasi CDC45-MCM-GINS (CMG) che svolge il DNA a doppio filamento alle forcelle di replicazione, fungendo da piattaforma centrale per l'assemblaggio del replisoma. Riferimenti correlati: PMID:16899510, PMID:32453425, PMID:34694004

• L'anello MCM2-7 contiene sei siti attivi ATPasici formati alle interfacce delle subunità; MCM5 contribuisce con un motivo conservato di dita di arginina alla tasca legante l'ATP della subunità adiacente, con contributi differenziali all'attività elicasica. Riferimenti correlati: PMID:32453425

• MCM5 si localizza nel nucleo ed è legato alla cromatina in modo dipendente dal ciclo cellulare, svolgendo un ruolo critico nella licenza di replicazione e nella progressione della fase S.

• Modifiche post-traduzionali come acetilazione, fosforilazione e coniugazione simil-ubiquitina regolano la stabilità e l'attività di MCM5.

• MCM5 è essenziale per la stabilità del genoma; mutazioni nel gene MCM5 sono associate alla sindrome di Meier-Gorlin 8 (MGORS8) e ad altri disturbi dello sviluppo.

• MCM5 è un membro della famiglia MCM di elicasi ATP-dipendenti, condividendo domini conservati con MCM2-7, ed è altamente espresso nelle cellule proliferanti.

• La proteina ha un peso molecolare previsto di ~82 kDa e contiene motivi di legame nucleotidico critici per la sua funzione enzimatica.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno (proteina ricombinante che comprende gli amminoacidi 1–230 di MCM5 umano) mira alla regione N-terminale, che contiene motivi conservati; è stata osservata reattività crociata con gli ortóloghi di topo e ratto. Per specie non elencate, verificare l'omologia di sequenza prima dell'uso.
• Per il Western blot (WB), considerare una diluizione iniziale di 1:500–1:2000 e utilizzare lisati nucleari o di cellule intere da cellule proliferanti, dove MCM5 è abbondante. La banda prevista è di ~82 kDa; notare che la fosforilazione può causare lievi spostamenti di mobilità.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), MCM5 mostra una colorazione nucleare dipendente dal ciclo cellulare; ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per preservare la proteina legata alla cromatina.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), l'anticorpo può arricchire MCM5 nativo e il suo complesso MCM associato; convalidare la co-IP di altre subunità MCM per confermare l'integrità del complesso.

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