Anticorpo policlonale di coniglio anti-MDA5 per WB, ELISA - Q9BYX4

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di MDA5

• MDA5 (IFIH1), noto anche come Helicard, RLR-2 o proteina 5 associata alla differenziazione del melanoma, è un membro della famiglia dei recettori simili a RIG-I (RLR) delle elicasi citoplasmatiche dell'RNA DExD/H-box.
• Funziona come sensore dell'immunità innata per gli acidi nucleici virali e svolge un ruolo importante nell'avvio delle risposte antivirali, compresa l'induzione degli interferoni di tipo I e delle citochine pro-infiammatorie (PubMed:28594402, PubMed:32169843, PubMed:33727702). Riferimenti correlati: PMID:28594402 PMID:32169843 PMID:33727702
• MDA5 riconosce l'RNA a doppio filamento lungo (>1 kb di lunghezza) e l'mRNA privo di 2'-O-metilazione al cappuccio 5' come pattern molecolari associati ai patogeni (PubMed:22160685). Riferimenti correlati: PMID:22160685
• In seguito al legame con il ligando, MDA5 si associa alla proteina di segnalazione antivirale mitocondriale MAVS, attivando le chinasi TBK1/IKBKE e la fosforilazione di IRF3/IRF7, promuovendo così la trascrizione dei geni dell'interferone.
• Questo recettore rileva un ampio spettro di virus, inclusi i picornavirus come EMCV e il rinovirus, i flavivirus come il virus della dengue e il virus del Nilo occidentale, il reovirus, il virus vaccinico e il coronavirus SARS-CoV-2 (PubMed:28606988, PubMed:33440148, PubMed:33514628). Riferimenti correlati: PMID:28606988 PMID:33440148 PMID:33514628
• A livello subcellulare, MDA5 si trova nel citoplasma, nel nucleo e nei mitocondri.
• È ampiamente espresso a bassi livelli, con un'abbondanza relativamente maggiore nella placenta, nel pancreas e nella milza, mentre è appena rilevabile nel cervello, nei testicoli e nei polmoni.
• MDA5 è una fosfoproteina e contiene domini CARD, un dominio elicasi DExD/H-box dipendente dall'ATP e un dominio C-terminale; è soggetto a ubiquitinazione regolatoria.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo comprende gli amminoacidi 277–490 di IFIH1 umano; può rilevare sia la proteina a lunghezza intera (~117 kDa) sia potenziali isoforme più corte o prodotti di clivaggio.
• Per il Western blot, si consiglia di utilizzare lisati di cellule umane stimolate con interferone o infettate da virus per aumentare l'espressione di MDA5. Includere controlli positivi e negativi appropriati e verificare le dimensioni delle bande rispetto ai pesi molecolari previsti.
• Quando si esegue un ELISA, ottimizzare le condizioni di rivestimento e rilevazione utilizzando l'anticorpo in combinazione con standard di MDA5 ricombinanti o nativi appropriati; è necessario valutare la reattività crociata con altri membri della famiglia RLR.
• Come per qualsiasi anticorpo policlonale, la variabilità da lotto a lotto può influire sulle prestazioni; si raccomanda di titolare e validare ogni nuovo lotto nel proprio specifico sistema di analisi.

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