Anticorpo policlonale di coniglio anti-MDC1 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q14676

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della MDC1

• MDC1 (Mediator of DNA damage checkpoint protein 1, mediatore della proteina 1 del checkpoint del danno al DNA), nota anche come NFBD1 (Nuclear factor with BRCT domains 1, fattore nucleare con domini BRCT 1), agisce come un lettore di istoni che lega specificamente l'istone H2AX fosforilato (γH2AX) nei siti di rottura doppia del DNA, fungendo da impalcatura molecolare per le proteine della riparazione del DNA e della trasduzione del segnale. Riferimenti correlati: PMID:12475977 PMID:12499369 PMID:12551934
• Dopo il danno al DNA, MDC1 facilita il reclutamento e la ritenzione dei fattori di riparazione del DNA, tra cui il complesso MRN (via NBN) e TOPBP1, nei fuochi di danno; è essenziale per la successiva fosforilazione e attivazione delle chinasi di checkpoint ATM, CHEK1 e CHEK2, che portano all'arresto del ciclo cellulare e alla stabilizzazione di p53. Riferimenti correlati: PMID:12607004 PMID:12607005 PMID:15201865 PMID:16049003
• MDC1 contribuisce alla stabilità cromosomica durante la mitosi promuovendo la formazione di filamenti di TOPBP1 che legano i cromosomi rotti, ed è necessaria per la riparazione per ricombinazione omologa consentendo il reclutamento di NBN ai DSB. Riferimenti correlati: PMID:18411307 PMID:18582474 PMID:18583988 PMID:30898438
• La proteina si localizza principalmente nel nucleo e si associa alla cromatina, in particolare nei fuochi indotti dal danno. È altamente espressa nel testicolo, suggerendo un ruolo nei processi meiotici o delle cellule germinali.
• MDC1 è una grande fosfoproteina (~227 kDa) che subisce multiple modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione, metilazione e ubiquitinazione, che regolano la sua interazione con il macchinario di riparazione del DNA.
• L'impianto alternativo genera più isoforme, e la proteina contiene domini BRCT in tandem che mediano il suo legame con le proteine fosforilate nei siti di danno.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1-350) della MDC1 umana; questa regione è esterna ai domini BRCT, e l'anticorpo può riconoscere la forma full-length e i frammenti N-terminali.
• Per Western blot (WB), a causa dell'elevato peso molecolare (~227 kDa), si consiglia di utilizzare gel di SDS-PAGE a bassa percentuale (es. gel di separazione al 6-8%) e un tempo di trasferimento sufficiente.
• Per l'immunohistrochimica (IHC-P) e l'immunofluorescenza (IF/ICC), validare i pattern di colorazione in tessuti noti per essere positivi (es. testicolo) o in modelli cellulari con danno al DNA indotto.
• L'anticorpo è stato riportato per l'uso in ELISA, ma le diluizioni di lavoro ottimali devono essere determinate empiricamente dall'utilizzatore finale.

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