Anticorpo policlonale anti-ME2 per WB, ELISA - P23368

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della ME2

• La ME2 (enzima malico NAD-dipendente, mitocondriale) è nota anche come ODS1 e enzima malico 2. È codificata dal gene ME2 nell'uomo.
• Questo enzima catalizza la decarbossilazione ossidativa del malato in piruvato, utilizzando NAD+ come cofattore. La reazione è fondamentale nel collegare il ciclo dell'acido citrico (TCA) al metabolismo del piruvato e alla produzione di NADH.
• La ME2 è un enzima alosterico e richiede ioni metallici bivalenti per l'attività, tipicamente Mg2+ o Mn2+, che facilitano il legame del substrato e la catalisi.
• La proteina si localizza nella matrice mitocondriale, dove svolge la sua funzione nel metabolismo del malato. Viene importata nei mitocondri tramite un peptide di transito N-terminale che viene clivato dopo il translocazione.
• Lo splicing alternativo genera varianti di trascrizione multiple, che potenzialmente danno origine a isoforme con proprietà regolatorie o pattern di espressione distinti.
• Le modifiche post-traduzionali includono l'acetilazione, che può regolare l'attività enzimatica o la stabilità in risposta agli stati metabolici cellulari.
• La ME2 è ampiamente espressa ma svolge ruoli specializzati nei tessuti con elevata attività mitocondriale, come fegato, cuore e cervello, dove contribuisce al metabolismo dei lipidi e degli amminoacidi.
• Le parole chiave di UniProt evidenziano le sue caratteristiche: struttura 3D (dati strutturali disponibili), acetilazione, enzima alosterico, splicing alternativo, sequenziamento proteico diretto, legame dei metalli, mitocondrio, NAD, ossidoreduttasi e proteoma di riferimento.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è progettato contro la regione C-terminale (aa 220-479) della ME2 umana. Questa regione è distinta dal peptide di transito N-terminale, quindi ci si aspetta che l'anticorpo riconosca la forma mitocondriale matura.
• Come anticorpo policlonale, potrebbe rilevare più isoforme derivanti dallo splicing alternativo. Nel Western blot, la banda predominante è prevista a ~65 kDa, ma potrebbero apparire bande aggiuntive a seconda del campione e delle condizioni.
• Per il WB, l'utilizzo di lisati arricchiti di mitocondri o di tessuti con alto contenuto mitocondriale (es. fegato, cuore) può migliorare la sensibilità di rilevamento. Ottimizzare le condizioni di blocco e lavaggio per ridurre il rumore di fondo.
• Nell'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per il rilevamento diretto o indiretto. Validare con la proteina ME2 ricombinante o lisati cellulari per confermare la specificità e determinare la diluizione ottimale.
• La reattività incrociata è indicata per la ME2 umana. Per altre specie, verificare l'omologia di sequenza nella regione dell'immunogeno prima dell'uso, poiché la reattività non è garantita.

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