Anticorpo Policlonale Anti-Mesotelina per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - Q13421

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Mesotelina

• La mesotelina, nota anche come antigene CAK1 o fattore potenziante pre-pro-megacariocitico, è codificata dal gene MSLN e esiste in più isoforme grazie allo splicing alternativo.
• La proteina viene sintetizzata come precursore che viene clivato in una mesotelina matura legata alla membrana tramite ancoraggio GPI e in un fattore potenziante megacariocitico (MPF) secretato.
• Si ritiene che la mesotelina ancorata alla membrana svolga un ruolo nell'adesione cellulare, mediando potenzialmente le interazioni tra cellule mesoteliali e altri tipi cellulari.
• L'MPF, il frammento secretato, è stato inizialmente identificato per la sua capacità di potenziare la formazione di colonie di megacariociti in vitro.
• Subcellolarmente, la mesotelina si localizza sulla membrana cellulare tramite il suo ancoraggio GPI, nonché nell'apparato di Golgi durante la biosintesi; il frammento MPF viene secretato all'esterno della cellula.
• L'espressione tissutale è più marcata nelle cellule polmonari e mesoteliali, con livelli inferiori in cuore, placenta e rene; a livello proteico è fortemente sovraespressa nei mesoteliomi, nei carcinomi ovarici e in alcuni carcinomi squamocellulari.
• Le modifiche post-traduzionali chiave includono glicosilazione N-linked, formazione di legami disolfuro, fosforilazione e l'attacco dell'ancoraggio GPI, che contribuiscono tutte alle sue proprietà strutturali e funzionali.
• Le parole chiave UniProt evidenziano il suo coinvolgimento nell'adesione cellulare, la sua associazione alla membrana e la sua rilevanza patologica tramite l'espressione aberrante nei tumori.

Indicazioni Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è stato progettato contro gli amminoacidi 296–606 della Mesotelina umana, coprendo il dominio extracellulare; questa regione può essere parzialmente condivisa con il frammento MPF, permettendo potenzialmente la rilevazione di entrambe le forme.
• Per il Western blotting, è prevista una banda intorno ai 69 kDa per il precursore full-length o la forma ancorata alla membrana; bande aggiuntive intorno ai 30–40 kDa potrebbero rappresentare il frammento MPF rilasciato.
• Durante l'esecuzione di IHC-P, considerare il recupero dell'antigene a pH 6 o 9 e convalidare la specificità della colorazione utilizzando sezioni di tessuto di mesotelio o cancro ovarico noti per esprimere alti livelli di Mesotelina.
• Per IF-P, fissare le cellule con paraformaldeide e permeabilizzare in modo appropriato; confermare la localizzazione del segnale sulla membrana cellulare e nell'apparato di Golgi.
• Convalidare la reattività con campioni di uomo, topo e ratto utilizzando linee cellulari positive e negative note; ad esempio, OVCAR-3 (cancro ovarico umano) o AB22 (mesotelioma murino) come controlli positivi.
• Le applicazioni ELISA possono beneficiare del test sia del formato di cattura che di rilevazione utilizzando proteina ricombinante di Mesotelina/MPF come standard.
• Si noti che l'anticorpo può rilevare sia la forma legata alla membrana che quella solubile; considerare la preparazione del campione (lisato cellulare vs. mezzo di coltura condizionato) per distinguerle.

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