Anticorpo policlonale coniglio anti-Mesothelina per WB, ELISA - Q13421

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Mesothelina

• La Mesothelina è codificata dal gene MSLN e prodotta come una proteina precursore che viene scissa in due prodotti: il fattore potenziante i megacariociti (MPF) e la Mesothelina matura legata alla membrana.
• La Mesothelina ancorata alla membrana potrebbe svolgere un ruolo nell'adesione cellulare, potenzialmente coinvolta nelle interazioni cellula-cellula o cellula-matrice.
• Il fattore potenziante i megacariociti (MPF) agisce come una citochina che può potenziare la formazione di colonie di megacariociti in vitro, suggerendo un ruolo nell'ematopoiesi.
• La proteina localizza sulla membrana cellulare tramite un ancoraggio GPI, ed è presente anche nell'apparato di Golgi e in forme secretorie a seguito di clivaggio e rilascio.
• La Mesothelina è espressa nelle cellule mesoteliali che rivestono la pleura, il peritoneo e il pericardio; a livelli inferiori nel polmone, cuore, placenta e rene.
• È altamente sovraespressa nei mesoteliomi, nei tumori ovarici e in alcuni carcinomi a cellule squamose, rendendola un utile marcatore tumorale e bersaglio terapeutico.
• Le modificazioni post-traduzionali includono la formazione di ponti disolfuro, la glicosilazione N-legata e l'ancoraggio GPI, che sono critici per la sua stabilità e associazione alla membrana.
• Lo splicing alternativo, la fosforilazione e gli eventi di clivaggio proteolitico regolano le sue molteplici forme funzionali e distribuzioni subcellulari.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde al dominio extracellulare (aa 296–606) della Mesothelina umana, che è conservato nel topo (in base alla reattività crociata), rendendolo adatto per il rilevamento di campioni umani e murini in WB ed ELISA.
• Per il Western blot, considerare che il precursore a lunghezza intera (~69 kDa) viene scisso, quindi potrebbero essere osservate più bande a seconda del campione (es. ~40 kDa per la Mesothelina matura e ~31 kDa per MPF). Validare con proteina ricombinante o lisati da linee cellulari ad alta espressione (es. linee di cancro ovarico come OVCAR-3 o linee di mesotelioma).
• Nell'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento; la concentrazione di rivestimento ottimale e l'abbinamento con un anticorpo di rilevamento devono essere determinati empiricamente, idealmente utilizzando Mesothelina ricombinante come standard.
• Essendo un anticorpo policlonale, può verificarsi variabilità tra lotti; eseguire sempre un test pilota con controlli positivi e negativi per confermare la reattività e la specificità.
• Considerare che l'MPF endogeno solubile nel siero o nei sobbrenadanti colturali cellulari potrebbe essere rilevato; regolare di conseguenza le condizioni di blocco e lavaggio per ridurre il rumore di fondo.

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