Anticorpo policlonale di coniglio anti-METTL3 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q86U44

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di METTL3

• Identità proteica: La subunità catalitica N(6)-adenosina-metiltransferasi METTL3, chiamata anche proteina simile alla metiltransferasi 3 (hMETTL3) o MT-A70, è la componente catalitica del complesso RNA N6-metiltransferasi METTL3-METTL14.

• Funzione principale della N6-metiltransferasi: L'eterodimero METTL3-METTL14 catalizza la formazione di N6-metiladenosina (m6A) sull'RNA, con preferenza per i motivi consenso 5'-[AG]GAC-3'. La modificazione m6A regola la stabilità, il processamento, l'efficienza di traduzione e l'editing dell'mRNA, influenzando diversi processi biologici. Riferimenti correlati: PMID:22575960 | PMID:24284625 | PMID:25719671 | PMID:27281194 | PMID:27373337 | PMID:27627798

• Ruoli biologici: La metilazione m6A mediata da METTL3 è coinvolta nella regolazione dell'orologio circadiano, nella differenziazione delle cellule staminali embrionali ed ematopoietiche, nella neurogenesi corticale, nell'omeostasi dei linfociti T, nella spermatogenesi, nell'oogenesi e nella risposta al danno del DNA.

• Localizzazione subcellulare: Prevalentemente nucleare con arricchimento nelle speckle nucleari; rilevato anche nel citoplasma, in linea con le sue funzioni nella modificazione dell'RNA nucleare e nella promozione della traduzione citoplasmatica.

• Specificità tissutale: Espresso ubiquitariamente a bassi livelli; rilevato in particolare nella milza, timo, prostata, testicolo, ovaio, intestino tenue, colon e leucociti del sangue periferico.

• Modificazioni post-traduzionali e parole chiave: Acetilato, fosforilato e soggetto a coniugazione con ubiquitina. Possiede domini di legame per l'RNA e per la S-adenosil-L-metionina, con un peso molecolare di 64.474 Da.

• Rilevanza oncologica: Si osserva una sovraespressione in diversi tipi di cancro, che promuove la proliferazione cellulare in parte attraverso un aumento della traduzione dell'mRNA indipendente dalla metiltransferasi. Riferimenti correlati: PMID:27117702

• Substrati aggiuntivi: Metila i miRNA primari (pri-miRNA) per facilitarne il riconoscimento e il processamento da parte di DGCR8, e modifica l'RNA di SARS-CoV-2 per attenuare la rilevazione immunitaria innata dipendente da RIG-I. Riferimenti correlati: PMID:25799998 | PMID:33961823

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: L'immunogeno corrisponde ai primi 1-156 amminoacidi N-terminali di METTL3 umano, che è ben conservato tra uomo, topo e ratto, a supporto della dichiarata reattività incrociata.
• Western blot (WB): Utilizzare lisati nucleari o di intera cellula; è attesa una banda vicino a 64 kDa. Si consiglia di validare le prestazioni dell'anticorpo nel vostro specifico sistema di campioni, poiché modificazioni post-traduzionali o varianti di isoforma possono influenzare la mobilità.
• Immunohistochimica (IHC-P) e immunofluorescenza (IF/ICC):strong> Il recupero dell'antigene può essere necessario per sezioni in paraffina. La colorazione nucleare e delle speckle nucleari deve essere predominante; possono essere osservati anche segnali citoplasmatici a seconda del tipo cellulare e delle condizioni di fissazione.
• ELISA: L'anticorpo può essere utilizzato come reagente di rilevamento contro METTL3 ricombinante o antigeni peptidici; può essere valutato l'abbinamento con un anticorpo di cattura anti-METTL3 per lo sviluppo di ELISA sandwich.
• Reattività incrociata: È riportato il riconoscimento di METTL3 di uomo, topo e ratto; si consiglia la verifica con appropriati controlli positivi e negativi per ogni specie.

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