Anticorpo monoclonale Anti-Mouse CD4 (APC/Cyanina7) per Citofluorimetria - P06332

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD4

• Il gene Cd4 codifica per la glicoproteina CD4 di superficie delle cellule T e produce una proteina transmembrana di tipo I a passaggio singolo, con quattro domini extracellulari simili alle immunoglobuline, un'elica transmembrana e una corta coda citoplasmatica. La proteina di topo, conosciuta anche come L3T4 o Ly-4, condivide questa architettura e svolge un ruolo centrale nell'immunità adattativa.
• CD4 agisce come corecettore per le molecole MHC di classe II. Sulle cellule T helper, si lega allo stesso complesso peptide-MHC riconosciuto dal recettore delle cellule T (TCR), aumentando così l'affinità complessiva dell'interazione e facilitando l'attivazione dei linfociti T.
• Dopo il legame con l'MHC, CD4 recluta la chinasi LCK della famiglia Src al complesso TCR-CD3. Questo innesca cascate di fosforilazione che portano alla produzione di linfochine, alla motilità e all'adesione delle cellule T, e all'attivazione completa delle cellule T helper.
• CD4 è essenziale per lo sviluppo delle cellule T helper nel timo e per la differenziazione dei monociti in macrofagi funzionali. Partecipa anche all'attivazione e all'espressione di citochine nei macrofagi, nelle cellule dendritiche e nelle cellule NK, spesso in modo indipendente da TCR/LCK.
• Subcellolarmente, CD4 si localizza prevalentemente sulla membrana cellulare, dove si associa con le zolle lipidiche e subisce modifiche post-traduzionali tra cui palmitoilazione, glicosilazione N-linked e fosforilazione. Queste modifiche regolano la sua localizzazione membrana e le sue funzioni di segnalazione.
• Specificità tissutale nel topo: espresso ad alti livelli sulle cellule T helper, e presente anche a livelli inferiori su macrofagi, cellule dendritiche e cellule NK. La sua espressione è un tratto distintivo della linea dei T helper.
• La proteina è un membro della superfamiglia delle immunoglobuline e contiene molteplici legami disolfuro, caratteristiche che contribuiscono alla sua stabilità strutturale e alla capacità di interagire con i suoi ligandi.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Poiché l'immunogeno è una proteina ricombinante, l'anticorpo può riconoscere un epitopo lineare; tenere conto di ciò quando si esegue il recupero dell'antigene o un western blot denaturante, sebbene questo anticorpo sia raccomandato per la citofluorimetria non denaturante.
• Per la citofluorimetria, titrare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale per la vostra popolazione cellulare, e includere appropriati controlli di isotipo e controlli di compensazione monocolore quando si utilizza la fluorescenza APC/Cyanina7.
• Preparare sospensioni di cellule singole da organi linfoidi (milza, linfonodi, timo) o sangue periferico, e bloccare i recettori Fc per minimizzare il legame non specifico prima della colorazione.
• Validare l'espressione nel ceppo di topo e nel tessuto di riferimento; tenere presente che CD4 è espresso ad alti livelli sulle cellule T helper ma può essere rilevato anche su sottopopolazioni di macrofagi, cellule dendritiche e cellule NK.

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