Anticorpo monoclonale Anti-Mouse CD45R/B220 (Biotina) per Citometria a Flusso - P06800 / P08575

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CD45R/B220

• CD45R/B220, codificato da Ptprc, è un'isoforma della tirosina-proteina fosfatasi di tipo recettore C, nota anche come antigene comune dei leucociti (L-CA), antigene linfocitario 5 (Ly-5) o T200. È una glicoproteina transmembrana espressa principalmente sulle cellule ematopoietiche.
• La proteina è un regolatore chiave dell'attivazione delle cellule T, agisce come molecola co-stimolatoria positiva dopo legame con DPP4. Contiene due domini PTPasi intracellulari in tandem: il primo ha attività enzimatica, mentre il secondo modula la specificità per il substrato.
• Dopo l'impegno del recettore delle cellule T, CD45 recluta e defosforila molecole di segnalazione come SKAP1, FYN e LYN, regolando con precisione la soglia di attivazione e prevenendo l'autoreattività.
• CD45 interagisce con CLEC10A sulle cellule presentanti l'antigene nella sinapsi immunologica; questa interazione sulle cellule dendritiche immature riconosce CD45 che trasporta l'antigene Tn sulle cellule T effettrici, contribuendo alla tolleranza periferica.
• L'isoforma B220 è generata da splicing alternativo ed è espressa prevalentemente sui linfociti B e alcune cellule T attivate, rappresentando un marcatore pan-B classico nei topi.
• Subcellulare, CD45 si localizza sulla membrana cellulare, nelle zappe membrane e nella sinapsi immunologica, dove il suo raggruppamento e l'esclusione dai microdomini di segnalazione influenzano la sua attività.
• Le modifiche post-traduzionali includono un'estensa glicosilazione legata a N e O, che influenzano la sua conformazione e le interazioni con i ligandi.
• La proteina di topo ha un peso molecolare previsto di ~144 kDa, ma la glicosilazione e le variazioni di isoforma determinano bande osservate tra 130 kDa e 144 kDa.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo biotinilato per determinare la concentrazione ottimale per la tua specifica popolazione cellulare. Includi controlli di isotipo appropriati e assicurati il blocco dei recettori Fc quando necessario.
• Poiché l'anticorpo è biotinilato, la rilevazione richiede un reagente secondario di streptavidina o avidina coniugato a fluoroforo. Scegli un coniugato di streptavidina con minima reattività crociata verso la specie del tuo campione.
• Valida la specificità della colorazione su linee cellulari conosciute positive e negative per CD45R/B220 (ad esempio, splenociti di topo o linee di cellule B) per confermare le prestazioni.
• Per pannelli multicolore, verifica la sovrapposizione spettrale e usa controlli di compensazione a colorazione singola.
• In alternativa, l'anticorpo può essere utilizzato in altre applicazioni dopo validazione, ma è principalmente ottimizzato per la citometria a flusso.

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