Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-MSH2 (Validato KO) per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P43246

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di MSH2

• MSH2 è un componente centrale del sistema di riparazione degli errori di appaiamento del DNA (MMR), essenziale per mantenere la stabilità genomica correggendo i mismatch base-base e i loop di inserzione-delezione (IDL) che si generano durante la replicazione del DNA.
• Forma due eterodimeri: MutSα con MSH6, che riconosce i mismatch di singole basi e i piccoli IDL (1-2 nucleotidi), e MutSβ con MSH3, che riconosce IDL più grandi fino a 13 nucleotidi.
• Dopo il legame al mismatch, l'eterodimero MutS piega il DNA e scherma circa 20 paia di basi, reclutando successivamente l'eterodimero MutLα (MLH1-PMS2) per formare un complesso ternario che dirige gli eventi di riparazione a valle, inclusi la discriminazione del filamento, l'escissione e la risintesi.
• MSH2 recluta l'elicasi del DNA MCM9 alla cromatina, che svolge il filamento di DNA contenente il mismatch per facilitare la riparazione (PubMed:26300262).
  Riferimenti correlati:
  PMID:26300262
• L'attività ATPasica di MutSα funge da interruttore molecolare: il legame al mismatch innesca lo scambio ADP→ATP, inducendo un cambiamento conformazionale che converte MutSα in una molla scorrevole capace di diffondersi lungo il DNA, un passaggio critico per l'MMR.
• Oltre all'MMR, MSH2 può partecipare anche alla riparazione per ricombinazione omologa del DNA e modula la regolazione del ciclo cellulare e l'apoptosi indotte da UV-B nei melanociti.
• MSH2 è espresso ubiquitariamente nei tessuti e si localizza principalmente nel nucleo e sui cromosomi.
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione, fosforilazione e ubiquitinazione, e le mutazioni in MSH2 sono associate al cancro colorettale ereditario non poliposico (HNPCC/sindrome di Lynch).

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per il Western blot, attendersi una banda specifica vicino a 105 kDa. Includere un campione validato knockout (KO) per confermare la specificità dell'anticorpo.
• Nei saggi di immunoprecipitazione (IP), l'anticorpo può precipitare MSH2 e i suoi partner di legame (es. MSH6, MSH3, MLH1). Ottimizzare le condizioni del tampone per preservare le interazioni proteiche.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), prevedere una localizzazione nucleare. Utilizzare metodi di fissazione e permeabilizzazione appropriati per garantire l'accessibilità al bersaglio.
• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1–300); gli epitopi in questa regione sono probabilmente ben esposti e conservati, potenzialmente supportando la reattività incrociata con il ratto.
• Quando si utilizza l'ELISA, titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale di rivestimento e l'intervallo di rilevamento; considerare un formato diretto o sandwich a seconda del disegno del saggio.

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