Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-MSH6 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P52701

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della MSH6

• La proteina di riparazione del mismatch del DNA Msh6, nota anche come proteina legante il mismatch G/T (GTBP) o p160, è un componente del sistema di riparazione del mismatch del DNA (MMR) post-replicativo.
• Eterodimerizza con MSH2 per formare il complesso MutS alfa, che riconosce i mismatch a singola base e i loop di inserzione-delezione dinucleotidici (IDL) nel DNA, piegando l'elica e proteggendo circa 20 paia di basi al legame.
• Dopo il riconoscimento del mismatch, MutS alfa recluta MutL alfa per formare un complesso ternario, innescando eventi di riparazione a valle inclusi la discriminazione del filamento, l'escissione e la risintesi.
• Il legame e l'idrolisi dell'ATP agiscono come interruttore molecolare: il DNA con mismatch induce lo scambio ADP→ATP, convertendo MutS alfa in una pinza di scorrimento che diffonde lungo il DNA, un processo essenziale per la riparazione del mismatch.
• Reclutata alla cromatina in fase G1 e all'inizio della fase S tramite il suo dominio PWWP, che si lega specificamente all'istone H3 trimetilato alla Lis36 (H3K36me3), consentendo la marcatura precoce delle origini di replicazione.
• Si localizza nel nucleo e sui cromosomi; le mutazioni in MSH6 sono associate al cancro colorettale ereditario non poliposico (HNPCC/sindrome di Lynch) e ad altre varianti della malattia.
• Annotata con parole chiave: danno del DNA, riparazione del DNA, legame al DNA, legame all'ATP, legame ai nucleotidi, interazione ospite-virus e splicing alternativo, riflettendo i suoi diversi ruoli regolatori.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Poiché l'immunogeno è un peptide sintetico dall'N-terminale, assicurarsi che l'anticorpo riconosca la proteina nativa validando in un sistema che esprime la MSH6 a lunghezza intera, come lisati di cellule HeLa o MCF7 per WB.
• Per IHC-P, ottimizzare il recupero dell'antigene (es. tampone citrato pH 6.0 o EDTA pH 9.0) e considerare che MSH6 è nucleare; valutare la colorazione in tessuto di adenocarcinoma colorettale umano o tonsilla come controlli positivi.
• In IF/ICC, permeabilizzare adeguatamente le cellule per accedere agli antigeni nucleari e considerare la colorazione combinata con un marcatore nucleare per confermare la localizzazione.
• Per ELISA, potrebbe essere richiesto un anticorpo accoppiato contro un epitopo non sovrapposto; validare con proteina MSH6 ricombinante o saggi di competizione peptidica.
• Poiché MSH6 è una proteina grande (153 kDa), utilizzare percentuali di gel appropriate (es. SDS-PAGE 6-8%) e tempi di trasferimento estesi per WB.

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