Anticorpo policlonale di coniglio anti-MSH6 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P52701

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di MSH6

• MSH6 codifica per la proteina Msh6 della riparazione dei mismatch del DNA, nota anche come GTBP, GTMBP o p160, un componente cruciale del sistema di riparazione dei mismatch post-replicativo (MMR).
• Msh6 forma un eterodimero con MSH2 per creare MutS alfa, il complesso che riconosce mismatch di singole basi e piccoli loop di inserzione-delezione (IDL) nel DNA.
• Dopo il legame con il mismatch, MutS alfa subisce cambiamenti conformazionali dipendenti dall'ATP, trasformandosi in un cursore che diffonde lungo la molecola di DNA per segnalare la riparazione.
• Viene reclutato nella cromatina nella fase G1 e all'inizio della fase S tramite il suo dominio PWWP, che lega la lisina 36 trimetilata dell'istone H3 (H3K36me3), consentendo una rilevazione rapida dei mismatch durante la replicazione.
• È localizzato prevalentemente nel nucleo e sui cromosomi, in linea con il suo ruolo nel mantenimento dell'integrità genomica.
• Le mutazioni in MSH6 sono associate alla sindrome di Lynch (cancro colorettale ereditario non poliposico, HNPCC5) e a una predisposizione a vari tipi di cancro.
• Modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione e fosforilazione, e lo splicing alternativo generano più isoforme che possono regolare finemente l'attività della MMR.
• Oltre alla riparazione dei mismatch, MutS alfa può partecipare alla riparazione per ricombinazione omologa del DNA, evidenziando il suo ruolo multiforme nel mantenimento del genoma.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1-100) di MSH6 umano; questa sequenza è conservata tra primati e roditori, in linea con la reattività incrociata osservata.
• Per il Western blotting è prevista una banda di circa 153 kDa; si consiglia di utilizzare marcatori di peso molecolare appropriati e di verificare la specificità con controlli knockout o siRNA.
• Quando si utilizza l'immunoistochimica (IHC-P), testare i metodi di recupero dell'antigene (ad esempio il recupero epitopico indotto dal calore) e ottimizzare le diluizioni dell'anticorpo su tessuti di controllo positivi e negativi.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), valutare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione; la localizzazione nucleare di MSH6 dovrebbe essere evidente, con una potenziale associazione alla cromatina.
• Nelle applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per cattura o rilevazione; convalidare l'accoppiamento con altri anticorpi anti-MSH6 se si sviluppa un test sandwich.
• Essendo un anticorpo policlonale, la coerenza tra lotti può variare; si raccomanda di includere un controllo positivo (ad esempio lisato di cellule HeLa) e un controllo negativo (ad esempio cellule knockout per MSH6) per garantire la specificità.

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