Anticorpo policlonale di coniglio Anti-MST1/STK4 per WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q13043

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di MST1/STK4

• La serina/treonina protein chinasi 4 (STK4), nota anche come MST1, KRS2 e YSK3, è una chinasi pro-apoptotica attivata dallo stress codificata dal gene STK4. È un componente chiave della via di segnalazione Hippo, che controlla le dimensioni degli organi e sopprime i tumori limitando la proliferazione e promuovendo l'apoptosi.
• MST1/STK4 forma il nucleo della cascata delle chinasi Hippo insieme alla sua proteina regolatrice SAV1, fosforilando e attivando LATS1/2 in complesso con MOB1, che successivamente fosforila e inattiva le oncoproteine YAP1 e TAZ.
• Dopo la scissione della caspasi durante l'apoptosi, il frammento chinasi attivo trasloca nel nucleo, dove fosforila l'istone H2B in Ser-14 (H2BS14ph), innescando direttamente la condensazione della cromatina e la frammentazione del DNA.
• MST1/STK4 fosforila molteplici bersagli a valle tra cui FOXO3 (promuovendo la traslocazione nucleare e la morte cellulare), FOXO1 (regolando la trascrizione di PMAIP1), SIRT1 (inibendo la deacetilazione di p53 per potenziare l'apoptosi dipendente da p53) e PKB/AKT1 (agendo come inibitore).
• Fosforila inoltre il recettore degli androgeni (AR) in Ser-650, sopprimendo l'attività di AR antagonizzando la formazione del complesso AR-cromatina e interagendo con la segnalazione di AKT1.
• La localizzazione subcellulare è prevalentemente citoplasmatica, ma la chinasi attiva scissa entra nel nucleo in condizioni apoptotiche per esercitare le sue funzioni pro-apoptotiche.
• Sebbene sia espressa in modo ubiquitario, i livelli proteici di MST1/STK4 aumentano notevolmente nel cancro della prostata passando dallo stato normale a quello maligno, suggerendo un potenziale ruolo nella progressione tumorale.
• Le caratteristiche strutturali chiave includono un dominio chinasi serina/treonina N-terminale e un dominio regolatore C-terminale con un motivo a spirale avvolta; le modifiche post-traduzionali includono acetilazione e fosforilazione, e la proteina full-length ha un peso molecolare previsto di circa 56 kDa.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 303-487 all'interno della regione regolatoria C-terminale di MST1/STK4 umano, evitando il dominio chinasi N-terminale; pertanto, gli anticorpi policlonali di coniglio ottenuti possono riconoscere epitopi conservati tra specie con elevata omologia in questa regione.
• Per Western blot (WB) è prevista una banda vicino a 56 kDa; tuttavia, a causa della scissione della caspasi durante l'apoptosi, un frammento attivo più piccolo di ~36 kDa può essere rilevato anche in campioni apoptotici: si consiglia di utilizzare controlli appropriati (ad esempio, cellule trattate con staurosporina).
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC) si possono osservare sia la localizzazione citoplasmatica che nucleare a seconda dello stato apoptotico delle cellule; i metodi di fissazione e permeabilizzazione devono essere ottimizzati per questo bersaglio.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), si noti che l'anticorpo è un preparato policlonale e può co-precipitare partner di legame come SAV1 o MOB1; validare nel proprio sistema di saggio con opportuni controlli negativi.
• Le prestazioni ELISA possono essere migliorate utilizzando l'anticorpo come reagente di rivestimento o di rilevamento se abbinato a un anticorpo monoclonale di cattura adatto e specifico per MST1/STK4.
• La reattività crociata è riportata per uomo, topo e ratto; l'allineamento della sequenza della regione immunogena mostra un'elevata conservazione tra queste specie, ma per altre specie verificare l'omologia prima dell'uso.

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