Anticorpo monoclonale Anti-NCF4/p40-phox per WB, IHC-P, IP, ELISA - Q15080

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NCF4/p40-phox

• NCF4/p40-phox è una subunità del complesso NADPH ossidasi dei fagociti, che genera anioni superossido trasferendo elettroni dal NADPH all'ossigeno molecolare.
• La proteina contiene domini SH3 e PX, pertanto è classificata come proteina 4 contenente domini SH3 e PX (SH3PXD4); è anche nota come fattore 4 della NADPH ossidasi dei neutrofili.
• L'attivazione del complesso richiede l'assemblaggio delle subunità citosoliche, tra cui NCF4, con il complesso core legato alla membrana; questo processo è iniziato dal legame dipendente dalla fosforilazione di NCF1/p47-phox a CYBA/p22-phox.
• L'espressione di NCF4 è limitata alle cellule ematopoietiche.
• Subcellularmente, si localizza nel citoplasma e nel citosol, e si associa alle membrane degli endosomi e alla membrana plasmatica dopo l'attivazione.
• La proteina è soggetta a fosforilazione e splicing alternativo, ed è implicata nella malattia granulomatosa cronica quando è difettosa.
• Il peso molecolare dell'isoforma canonica è di circa 39 kDa.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che comprende gli amminoacidi 240-339, localizzato nella regione C-terminale di NCF4 umano. Questa regione include parte del dominio PX e le sequenze adiacenti, quindi l'anticorpo può riconoscere NCF4 a lunghezza intera e potenzialmente varianti di splicing che contengono questo segmento.
• Per il Western blotting, ci si aspetta una banda vicino a 39 kDa in condizioni riducenti; si consiglia di utilizzare lisati di cellule ematopoietiche (ad esempio HL-60, neutrofili) come controllo positivo.
• Per l'immunoprecipitazione, il formato monoclonale di coniglio offre spesso un'alta affinità, ma la co-immunoprecipitazione dei componenti del complesso NADPH ossidasi può richiedere condizioni di lisi mildi per mantenere le interazioni proteina-proteina.
• Nell'ELISA, l'anticorpo prodotto contro l'immunogeno peptidico può essere utilizzato per rilevare NCF4 ricombinante o nativo; l'abbinamento con un anticorpo specifico per un epitopo diverso può consentire lo sviluppo di un ELISA sandwich.

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