Anticorpo monoclonale Anti-NF-kB p65/RelA (Validato KO) per WB, IF/ICC, IP, ELISA, ChIP - Q04206

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NF-kB p65/RelA

• NF-kB p65/RelA è una subunità del complesso del fattore di trascrizione NF-kB, che esiste come omodimeri o eterodimeri; l'eterodimero con NFKB1 è la forma più abbondante e agisce come attivatore trascrizionale.
• Gioca un ruolo centrale nell'infiammazione, nell'immunità, nella differenziazione, nella crescita cellulare, nella tumorigenesi e nell'apoptosi attraverso la regolazione dell'espressione dei geni bersaglio.
• L'attivazione di NF-kB coinvolge la fosforilazione e la degradazione degli inibitori I-kB, portando al rilascio e alla translocazione nucleare del complesso attivo p65/RelA.
• Essenziale per l'espressione dei geni delle citochine nelle cellule T. Riferimenti correlati: PMID:15790681
• Fattore di trascrizione chiave che regola la risposta all'interferone durante l'infezione da SARS-CoV-2. Riferimenti correlati: PMID:33440148
• Si associa alla cromatina nelle regioni del promotore NF-kB tramite interazione con DDX1, modulando l'accessibilità del promotore.
• Soggetto a molteplici modifiche post-traduzionali tra cui acetilazione, fosforilazione, metilazione e ubiquitinazione, che ne regolano finemente l'attività.
• Predominantemente citoplasmatico nelle cellule a riposo, si transloca nel nucleo dopo l'attivazione; si trova anche nel nucleo in condizioni basali.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde a un peptide sintetico della regione C-terminale (aa 450-551) di NF-kB p65 umano. Per applicazioni come WB, prevedere una banda intorno a 58-60 kDa; considerare l'uso di controlli di carico appropriati e la validazione del segnale in linee cellulari KO.
• Questo anticorpo è adatto per molteplici applicazioni; per IF/ICC, è possibile osservare segnali sia nucleari che citoplasmatici a seconda dello stato di attivazione di NF-kB. Includere campioni non trattati e stimolati per il confronto.
• Per saggi ChIP, ottimizzare le condizioni di crosslinking e sonicazione per il tipo di cellule. Le prestazioni dell'anticorpo devono essere validate con regioni del gene bersaglio positive e negative.
• È riportata la reattività crociata con topo, ratto e scimmia; verificare sempre la specificità nella specie e nel tessuto di interesse prima di espandere gli esperimenti.
• Quando si utilizza questo anticorpo validato KO, considerare l'inclusione di un controllo negativo (es. knockdown con siRNA o lisato CRISPR KO) per confermare la specificità della banda in WB.

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