Anticorpo monoclonale anti-NF-κB2 per WB, IHC-P, ELISA - Q00653

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NF-κB2

• NF-κB2 codifica per la subunità p100, che subisce un processo proteolitico per generare la subunità attiva p52 legante il DNA; anche l'isoforma p49 è prodotta tramite splicing alternativo.
• p100/p52 appartiene alla famiglia dei fattori di trascrizione NF-kappa-B, forma omodimeri o eterodimeri con proteine simili a Rel (RELA, RELB, REL, NFKB1) per regolare l'espressione genica.
• Nella via di segnalazione non canonica NF-kappa-B, p100 associato a RelB viene fosforilato da IKKα e processato in p52, portando alla traslocazione nucleare del complesso attivatore trascrizionale RelB-p52.
• Gli omodimeri di p52 agiscono come repressori trascrizionali, mentre gli eterodimeri RelB-p52 attivano la trascrizione, legandosi ai siti kappa-B (5'-GGRNNYYCC-3') nei promotori di geni immunitari e infiammatori.
• NF-κB2 è coinvolto in un'ampia gamma di processi biologici tra cui infiammazione, immunità, crescita cellulare, differenziazione e apoptosi.
• In sinergia con RELB, NF-κB2 regola l'orologio circadiano reprimendo l'attività dell'attivatore trascrizionale dell'eterodimero CLOCK-BMAL1.
• La localizzazione subcellulare è sia citoplasmatica (come complessi inattivi p100/I-kappa-B) che nucleare (come dimeri attivi contenenti p52).
• Le ripetizioni Ank, il legame isopeptidico e la coniugazione ubl (SUMOilazione) sono modifiche post-traduzionali; la proteina è anche fosforilata.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 745-877 all'interno del dominio C-terminale a ripetizioni ankirine di p100, che è assente nella subunità processata p52; pertanto, l'anticorpo può riconoscere preferenzialmente p100 a lunghezza completa (~97 kDa). Se necessario, valutare di convalidare la reattività sia verso p100 che p52 nel proprio sistema modello.
• Per il western blotting, utilizzare condizioni standard di SDS-PAGE e trasferimento; è prevista una banda vicino a 97 kDa per p100. Bande inferiori possono rappresentare intermedi di processo o prodotti di degradazione.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), si possono osservare sia colorazioni nucleari che citoplasmatiche a seconda dello stato di attivazione di NF-κB2 nel tessuto. Includere controlli appropriati per la specificità del segnale.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato con p100 ricombinante o lisati cellulari; assicurarsi che l'antigene di rivestimento contenga la regione epitopica C-terminale.
• La reattività crociata con topo e ratto suggerisce la conservazione della sequenza immunogena tra queste specie, ma si consiglia l'allineamento di sequenza per confermare l'identità dell'epitopo.

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