Anticorpo Monoclonale Anti-NFKB1 per WB, IHC-P, IP, ELISA, CHIP - P19838

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NF-kB

• NF-κB è un fattore di trascrizione pleiotropico presente in quasi tutti i tipi cellulari, che agisce come punto finale di cascate di segnalazione attivate da stimoli diversi e regola processi come infiammazione, immunità, differenziazione, crescita cellulare, tumorogenesi e apoptosi.
• NF-κB funziona come complessi omo- o eterodimerici formati da proteine contenenti domini simili a Rel, tra cui RELA/p65, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL e NFKB2/p52; l'eterodimero p65-p50 è la forma più abbondante.
• NFKB1 codifica un precursore di 105 kDa (p105) che subisce un processamento cotraduzionale mediato dal proteasoma per generare la subunità attiva di 50 kDa che lega il DNA (p50). Riferimenti correlati: PMID:1423592
• La subunità p50 si associa a RELA/p65 per formare l'eterodimero NF-κB p65-p50, che lega il sito consenso κB 5′-GGRNNYYCC-3′ nelle regioni enhancer dei geni della risposta immunitaria e della reazione di fase acuta. Riferimenti correlati: PMID:1740106, PMID:7830764
• Mentre gli eterodimeri p65-p50 e RelB-p50 agiscono come attivatori trascrizionali, l'omodimero p50-p50 funge da repressore ma può diventare un attivatore in seguito all'associazione con BCL3.
• NFKB1/p105 funge anche da molecola di ritenzione citoplasmatica per le proteine NF-κB associate, mantenendole inattive nel citoplasma; la sua degradazione da parte del sistema ubiquitina-proteasoma rilascia MAP3K8 attiva per propagare la segnalazione MAPK.
• La localizzazione subcellulare è dinamica: i complessi NF-κB risiedono principalmente nel citoplasma in uno stato inattivo legati agli inibitori IκB e si traslocano nel nucleo dopo l'attivazione.
• Modificazioni post-traduzionali come fosforilazione, acetilazione, idrossilazione e ubiquitinazione regolano l'attività, la stabilità e le interazioni di NFKB1.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per il Western blot, la frazionamento nucleare e citoplasmatico può aiutare a distinguere le bande di p105 (105 kDa) e p50 (50 kDa); validare con controlli di caricamento appropriati.
• Nell'IHC-P, considerare di ottimizzare il recupero dell'antigene e validare i pattern di colorazione con controlli positivi noti per NF-κB (es. tessuti immunitari) e negativi.
• Per il CHIP, verificare che l'anticorpo possa arricchire le regioni promotrici contenenti siti κB; sono raccomandati esperimenti pilota con loci genomici positivi (es. TNFA) e negativi.
• Dato che l'immunogeno è un peptide sintetico, la reattività crociata con altri membri della famiglia NF-κB dovrebbe essere valutata mediante knockdown con siRNA o competizione con il peptide immunizzante.

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