Anticorpo policlonale Anti-NFKB1 per WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P19838

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NFKB1

• NFKB1 codifica il precursore p105 che viene elaborato nella subunità attiva p50. p105 funge da fattore di ritenzione citoplasmatica per le proteine NF-kappa-B, mentre p50 costituisce il complesso attivo NF-kappa-B con RELA/p65. Riferimenti correlati: PMID:1423592

• NF-kappa-B è un fattore di trascrizione pleiotropico coinvolto nell'infiammazione, immunità, crescita cellulare, tumorigenesi e apoptosi. Esiste come omodimeri o eterodimeri di proteine contenenti il dominio simile a Rel, con l'eterodimero p65-p50 che è la forma più abbondante.

• Il complesso NF-kappa-B p65-p50 si lega specificamente alla sequenza consenso kappa-B 5'-GGRNNYYCC-3' nelle regioni enhancer dei geni bersaglio, regolando le risposte immunitarie e di fase acuta. Riferimenti correlati: PMID:1740106, PMID:7830764

• NFKB1 è localizzato sia nel citoplasma che nel nucleo, con i complessi NF-kappa-B inattivi trattenuti nel citoplasma dagli inibitori I-kappa-B. Dopo stimolazione, I-kappa-B viene fosforilato e degradato, permettendo la translocazione nucleare di NF-kappa-B.

• Le modificazioni post-traduzionali come la fosforilazione, l'acetilazione e l'ubiquitinazione regolano l'attività di NF-kappa-B.

• L'omodimero p50-p50 agisce come un repressore trascrizionale ma può diventare un attivatore quando associato a BCL3.

• NFKB1 gioca anche un ruolo nella repressione della segnalazione MAPK complessandosi con MAP3K8; la degradazione dipendente dal proteasoma di p105 rilascia MAP3K8 attivo.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 740-964 di NFKB1, situati nella regione C-terminale di p105. Pertanto, ci si aspetta che l'anticorpo rilevi il precursore p105 a lunghezza intera (~105 kDa) piuttosto che la subunità elaborata p50. Considerare questo durante la progettazione degli esperimenti per distinguere p105 da p50.
• Per il Western blot, è prevista una banda a circa 105 kDa. Ottimizzare i controlli di carico e la diluizione dell'anticorpo per il sistema di campioni in uso.
• Nell'immunoprecipitazione, validare la capacità dell'anticorpo di catturare i complessi nativi di NFKB1 in condizioni non denaturanti.
• Per IHC-P e IF/ICC, confermare la localizzazione subcellulare (citoplasmatica vs nucleare) in condizioni basali e stimolate per riflettere lo stato di attivazione di NF-kappa-B.
• Le applicazioni ELISA potrebbero richiedere la titolazione dell'anticorpo contro l'antigene ricombinante o i lisati cellulari per stabilire una concentrazione di lavoro adeguata.

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