Anticorpo policlonale anti-NLRC4 per WB - Q3UP24

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di NLRC4

• NLRC4 (proteina 4 contenente il dominio CARD della famiglia NLR) è noto anche come Ipaf, CARD12, CLAN e con altri alias; è un componente chiave degli inflammasomi che attivano le risposte immunitarie innate contro i patogeni intracellulari.
• La proteina agisce come sensore che assembla il complesso dell'inflammasoma NLRC4 in seguito al riconoscimento indiretto di componenti batterici e fungini, portando all'attivazione della caspasi-1, alla produzione di citochine pro-infiammatorie (ad es., IL-1β) e alla piroptosi dei macrofagi.
• NLRC4 funziona in cooperazione con le proteine della famiglia NAIP (NAIP1, NAIP2, NAIP5), che legano direttamente ligandi specifici derivati da patogeni, come la flagellina, le proteine dell'asta del T3SS (ad es., PrgJ) e le proteine dell'ago del T3SS, innescando così l'assemblaggio dell'inflammasoma NLRC4.
• L'inflammasoma NLRC4 è fondamentale per la difesa dell'ospite contro batteri Gram-negativi come Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Legionella pneumophila e Pseudomonas aeruginosa, nonché contro il patogeno fungino Candida albicans.
• Nella mucosa intestinale, NLRC4 distingue tra batteri commensali e patogeni, inducendo la secrezione protettiva di IL-1β specificamente in risposta a patogeni come Salmonella o P. aeruginosa.
• A livello subcellulare, NLRC4 è localizzato nel citosol e può formare aggregati dell'inflammasoma in seguito all'attivazione.
• Espressione tissutale: NLRC4 è espresso dai fagociti mononucleari intestinali, sottolineando il suo ruolo nell'immunità mucosale.
• La proteina presenta un dominio C-terminale di ripetizioni ricche di leucina (LRR), un dominio centrale di legame ai nucleotidi (NBD/NACHT) con attività di legame all'ATP e un dominio CARD N-terminale; durante l'attivazione dell'inflammasoma è soggetta a fosforilazione.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato per questo anticorpo policlonale corrisponde agli amminoacidi 71-170 di NLRC4 murino. Questa regione si trova all'interno del dominio N-terminale e può fornire reattività crociata con gli ortologhi umani e di ratto grazie alla conservazione della sequenza. Validare la reattività crociata nel proprio specifico sistema sperimentale.
• Il peso molecolare previsto di NLRC4 è di circa 116 kDa. Per il Western blot, considerare l'uso di un gel con una percentuale adeguata e condizioni di trasferimento appropriate, includendo controlli positivi come linee cellulari di macrofagi (ad es., J774, RAW 264.7) stimolate per indurre l'espressione di NLRC4.
• Nelle applicazioni di immunofluorescenza (IF) o IF-P, NLRC4 è tipicamente citosolico in condizioni basali, ma può formare aggregati puntiformi dell'inflammasoma in seguito alla stimolazione. La co-colorazione con ASC o caspasi-1 può aiutare a visualizzare gli inflammasomi attivati.
• Per le applicazioni ELISA, questo anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevazione dopo un'adeguata validazione dell'abbinamento. Titolare e testare nelle condizioni specifiche del proprio saggio.

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