Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-NLRP3 per WB, ELISA - Q96P20

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NLRP3

• NLRP3 (proteina 3 contenente domini NACHT, LRR e PYD), noto anche come criopirina o CIAS1, è un componente sensore centrale dell'inflammasoma NLRP3, un complesso multiproteico fondamentale per la difesa immunitaria innata.
• Dopo aver rilevato diversi segnali associati a patogeni e danni, tra cui ATP extracellulare, nigericina, cristalli di urato monosodico o amiloide-beta, NLRP3 avvia l'assemblaggio dell'inflammasoma reclutando PYCARD/ASC e procaspasi-1, portando all'attivazione della caspasi-1, alla secrezione di IL-1β/IL-18 e alla morte cellulare piroptotica. Riferimenti correlati: PMID:16407889 PMID:18403674 PMID:18604214 PMID:27432880 PMID:23582325 PMID:28847925 PMID:31189953
• L'attivazione di NLRP3 è rigorosamente controllata; richiede l'efflusso di K+ e coinvolge il trasporto mediato da dineina al centro organizzatore dei microtubuli (MTOC), dove viene sbloccato da NEK7 prima di rilocalizzarsi alle membrane disperse della rete trans-Golgi (dTGN) tramite legame al fosfatidilinositolo 4-fosfato per formare l'inflammasoma attivo. Riferimenti correlati: PMID:36442502 PMID:39173637 PMID:30487600 PMID:34554188
• Oltre al suo ruolo canonico nell'inflammasoma, NLRP3 funziona anche indipendentemente nel nucleo come regolatore trascrizionale, promuovendo la differenziazione dei linfociti Th2 legandosi al DNA e guidando l'espressione di IL4.
• La proteina si localizza dinamicamente in più compartimenti subcellulari, tra cui citosol, mitocondri, apparato di Golgi, reticolo endoplasmatico e nucleo, e può essere secreta.
• Espresso prevalentemente nei macrofagi, NLRP3 è presente anche nelle cellule dendritiche, nei linfociti B e T, nonché negli epiteli squamosi stratificati e nei corpi di Hassall del timo. Riferimenti correlati: PMID:33231615 PMID:34133077 PMID:11786556 PMID:17164409
• Le principali modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, ADP-ribosilazione, palmitoilazione, formazione di legami disolfuro e ubiquitinazione, regolano finemente la stabilità, la localizzazione e l'attività di NLRP3.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Per il Western blotting, si consiglia di utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (ad es. 8%) e ottimizzare le condizioni di trasferimento per NLRP3 ad alto peso molecolare (~118 kDa). Può essere utile un controllo positivo come il lisato di macrofagi THP-1 stimolati con LPS.
• Questo anticorpo monoclonale di coniglio è adatto per formati ELISA standard; durante l'allestimento del saggio, valutare le concentrazioni di coating e abbinare l'anticorpo a un appropriato anticorpo di rilevazione nella tua matrice di campione specifica.
• Dato che l'espressione di NLRP3 può essere indotta in condizioni infiammatorie, il pre-trattamento dei modelli cellulari con attivatori di NLRP3 (ad es. LPS più nigericina) può migliorare la rilevazione sia in WB che in ELISA.

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