Anticorpo monoclonale di coniglio anti-NLRP3 per WB, IP, ELISA - Q96P20

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di NLRP3

• NLRP3 (proteina 3 contenente i domini NACHT, LRR e PYD), nota anche come criopirina, è un recettore citosolico di riconoscimento dei pattern che funge da componente sensore dell'inflammasoma NLRP3. Riferimenti correlati: PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:18604214
• In seguito all'attivazione da parte di patogeni, cristalli o particelle ambientali, NLRP3 oligomerizza e recluta ASC e la pro-caspasi-1, formando un complesso inflammasomiale che promuove l'attivazione della caspasi-1; ciò porta al clivaggio e alla secrezione delle citochine pro-infiammatorie IL-1β e IL-18, nonché alla piroptosi mediata dalla gasdermina D. Riferimenti correlati: PMID:23582325, PMID:28847925, PMID:31189953
• L'inflammasoma NLRP3 promuove inoltre la secrezione non convenzionale dell'allarmogeno HMGB1, amplificando le risposte infiammatorie. Riferimenti correlati: PMID:22801494
• In condizioni di riposo, NLRP3 è mantenuto in uno stato autoinibito legato all'ADP; diversi stimoli che inducono l'efflusso di K+ e alterazioni della membrana ne innescano l'attivazione conformazionale. Riferimenti correlati: PMID:35114687
• Dopo l'attivazione, NLRP3 viene trasportato al centro di organizzazione dei microtubuli (MTOC), dove viene sbloccato da NEK7, quindi si ricolocalizza nelle vescicole della rete trans-Golgi dispersa (dTGN) legandosi al fosfatidilinositolo 4-fosfato (PtdIns4P), portando all'assemblaggio attivo dell'inflammasoma. Riferimenti correlati: PMID:36442502, PMID:39173637
• Indipendentemente dal suo ruolo nell'inflammasoma, NLRP3 può agire come regolatore della trascrizione nelle cellule T helper 2 (Th2), legandosi al DNA e promuovendo l'espressione di IL-4 per guidare la differenziazione Th2, con implicazioni per l'asma allergica e la crescita tumorale.
• A livello subcellulare, NLRP3 si localizza nel citosol, nei mitocondri, nel reticolo endoplasmatico e nell'apparato del Golgi, e può essere secreto; è espresso prevalentemente nei macrofagi, nelle cellule dendritiche e nelle barriere epiteliali, con livelli inferiori nei monociti e negli osteoblasti.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 100–210 vicini al dominio PYD N-terminale di NLRP3 umano; considerare che l'anticorpo potrebbe riconoscere un epitopo in questa regione, aspetto che può essere rilevante nella valutazione di costrutti troncati o mutanti.
• Per il Western blot, validare l'anticorpo utilizzando lisati di macrofagi umani o di cellule mononucleate del sangue periferico, nei quali l'espressione di NLRP3 è nota; è prevista una banda a circa 118 kDa.
• Negli esperimenti di immunoprecipitazione, assicurarsi che le condizioni di lisi siano ottimizzate per preservare l'integrità del complesso NLRP3, poiché il bersaglio interagisce con numerose proteine nell'inflammasoma.
• Per le applicazioni ELISA, si raccomandano titolazioni preliminari a scacchiera con NLRP3 ricombinante o lisati cellulari per stabilire le concentrazioni ottimali di rivestimento e rilevamento.
• Poiché l'attivazione di NLRP3 può coinvolgere modificazioni post-traduzionali, come ubiquitinazione e fosforilazione, considerare il trattamento delle cellule con stimoli appropriati, ad esempio LPS + nigericina, per osservare i cambiamenti nei pattern di rilevamento.

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