Anticorpo Policlonale Anti-Notch1 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P46531

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di Notch1

• Notch1 (proteina omologa 1 del locus neurogenico notch) è una proteina transmembrana di tipo I a passaggio singola, nota anche come proteina notch associata alla traslocazione TAN-1, codificata dal gene NOTCH1 nell'uomo.
• Funziona come recettore per i ligandi legati alla membrana Jagged-1 (JAG1), Jagged-2 (JAG2) e Delta-1 (DLL1), svolgendo un ruolo centrale nella determinazione del destino cellulare, differenziazione, proliferazione e apoptosi.
• All'attivazione del ligando, il dominio intracellulare di notch (NICD) viene rilasciato e forma un complesso attivatore trascrizionale con RBPJ/RBPSUH per regolare i geni bersaglio a valle, inclusi quelli del locus enhancer of split.
• È coinvolto in molteplici processi di sviluppo: angiogenesi (regolando negativamente la proliferazione e la migrazione delle cellule endoteliali), maturazione timica delle cellule CD4+ e CD8+, differenziazione follicolare, sviluppo cerebellare tramite DNER, e determinazione della simmetria sinistra/destra attraverso l'equilibrio delle ciglia nell'organizzatore sinistra-destra.
• Reprime la differenziazione neuronica e miogenica; può potenziare la funzione di HIF1A sequestrando HIF1AN; richiesto per l'astrogenesi protettiva mediata da THBS4 dopo l'infortunio.
• La localizzazione subcellulare include la membrana cellulare, la membrana dell'endosoma tardivo e il nucleo, coerente con i suoi ruoli di segnalazione e trascrizionale.
• Espresso nella milza fetale, nel tronco encefalico e nel polmone; negli adulti, si trova principalmente nei tessuti linfoide.
• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione, formazione di ponti disolfuro, idrossilazione e fosforilazione; la proteina è soggetta a processamento proteolitico e ubiquitinazione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 2456-2555 di Notch1 umano (NP_060087.3), situati nel dominio citoplasmatico. Questa regione è conservata nell'uomo, nel mouse e nel ratto, supportando la reattività crociata riportata.
• Per il Western blotting, si consiglia uno standard ad alto peso molecolare e un gel di poliacrilamide a bassa percentuale (es. 6–8%) a causa delle grandi dimensioni della proteina (273 kDa). Potrebbero essere necessari tempi di trasferimento prolungati per un efficiente trasferimento sulla membrana.
• Validare l'anticorpo in un sistema campione adatto come HeLa, Jurkat o altre linee cellulari note per esprimere Notch1. Un tessuto di controllo positivo come la milza o il tronco encefalico può essere appropriato per IHC-P.
• Per l'immunoistochimica (paraffina), può essere presa in considerazione il recupero dell'antigene utilizzando tampone citrato mediato dal calore (pH 6,0) o tampone EDTA (pH 9,0), sebbene le condizioni ottimali debbano essere determinate sperimentalmente.
• In IF/ICC, si suggerisce la permeabilizzazione con Triton X-100 o saponina per rilevare epitopi intracellulari, poiché l'immunogeno si trova all'interno della coda citoplasmatica.
• Notch1 subisce un processo proteolitico; in WB possono essere osservate più bande. Il precursore a lunghezza intera (~300 kDa) e le forme transmembrana/citoplasmatiche elaborate (~120 kDa e ~110 kDa) possono essere rilevate, a seconda del tipo cellulare e dello stato di attivazione.

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