Anticorpo policlonale di coniglio anti-NPAS2 per WB, IF/ICC, ELISA - Q99743

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di NPAS2

• NPAS2 (proteina 2 contenente il dominio PAS neuronale), nota anche come MOP4, bHLHe9 o PASD4, è un fattore di trascrizione basico elica-ansa-elica-PAS che costituisce un componente centrale dell'orologio circadiano. Funziona come attivatore trascrizionale nel ramo positivo del circuito di feedback dell'orologio molecolare.
• La proteina forma eterodimeri con BMAL1 (o BMAL2) e si lega agli elementi E-box (5'-CACGTG-3') nei promotori dei geni controllati dall'orologio, inducendo la trascrizione ritmica dei repressori centrali dell'orologio (PER1/2/3, CRY1/2) e di bersagli a valle coinvolti nel metabolismo, nel sonno e in altri processi fisiologici.
• NPAS2 svolge un ruolo critico nel mantenimento dei comportamenti circadiani in condizioni normali di luce/buio e alimentazione, nonché nella sincronizzazione del comportamento alimentare con la disponibilità programmata di cibo. Contribuisce inoltre all'omeostasi del sonno e alla regolazione dei comportamenti simili all'ansia attraverso la modulazione diurna dell'espressione del recettore GABARA1 nel cervello.
• Oltre all'orologio centrale, NPAS2 regola la trascrizione genica nei tessuti periferici, come il fegato, controllando importanti vie metaboliche. È inoltre coinvolta nella risposta al danno del DNA regolando i geni del ciclo cellulare e della riparazione del DNA.
• L'eterodimero NPAS2-BMAL1 partecipa a un circuito di feedback secondario attivando i recettori nucleari NR1D1/2 e RORA/B/G, che a loro volta reprimono e attivano rispettivamente la trascrizione di BMAL1, contribuendo alla robustezza circadiana.
• A livello subcellulare, NPAS2 si localizza nel nucleo, in accordo con il suo ruolo di fattore di trascrizione. Contiene domini PAS leganti l'eme e il legame dell'eme può influenzarne l'attività.
• Le modificazioni post-traduzionali e le interazioni proteiche sono fondamentali per determinare la periodicità circadiana; le alterazioni dei ritmi mediati da NPAS2 sono implicate nelle malattie cardiovascolari, nel cancro, nelle sindromi metaboliche e nell'invecchiamento.
• La proteina è espressa ubiquitariamente, con ruoli rilevanti nel nucleo soprachiasmatico (SCN) del cervello (l'orologio centrale) e negli oscillatori periferici.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno di questo anticorpo policlonale di coniglio corrisponde a una sequenza compresa tra gli amminoacidi 45 – 240 di NPAS2 umano (NP_002509.2), una regione che comprende parte del dominio bHLH N-terminale e il primo dominio PAS. Questo design può conferire reattività verso le forme native e denaturate.
• Per il Western blot, è prevista una banda intorno a 92 kDa. Si consiglia di utilizzare condizioni riducenti e protocolli standard di SDS-PAGE. Poiché NPAS2 è soggetta a cicli circadiani, l'orario di raccolta dei campioni deve essere rigorosamente controllato per acquisire il livello di espressione ottimale.
• Durante l'esecuzione di immunofluorescenza/immunocitochimica, NPAS2 mostra tipicamente una localizzazione nucleare. I metodi di fissazione e permeabilizzazione devono essere ottimizzati per i bersagli nucleari; la co-colorazione con un marcatore nucleare può confermare la specificità.
• Nelle applicazioni ELISA, validare l'anticorpo nel sistema di campioni pertinente e includere controlli appropriati per valutare il background. Gli anticorpi policlonali possono presentare variabilità tra lotti, pertanto si raccomanda di monitorare costantemente il lotto.
• È riportata una reattività crociata con NPAS2 di topo e ratto; tuttavia, si consiglia l'allineamento della sequenza della regione immunogena per stimare la reattività in altre specie. Per ogni nuova specie o applicazione, è essenziale una validazione empirica.

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