Anticorpo policlonale Anti-NRF2 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q16236

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NRF2

• NRF2 (fattore 2 correlato all'eritroide nucleare 2, noto anche come NFE2L2) è un fattore di trascrizione codificato dal gene NFE2L2, con un peso molecolare di ~68 kDa. Appartiene alla famiglia dei leucine zipper basici "cap 'n' collar" (CNC-bZIP).
• NRF2 svolge un ruolo centrale nella difesa cellulare contro lo stress ossidativo legandosi agli elementi di risposta antiossidante (ARE) nelle regioni promotrici dei geni citoprotettivi, inclusi gli enzimi detossicanti di fase 2, neutralizzando così gli elettrofili reattivi. Riferimenti correlati: PMID:11035812, PMID:19489739, PMID:29018201
• In condizioni basali, NRF2 viene ubiquitinato e degradato rapidamente nel citoplasma dal complesso dell'ubiquitina ligasi E3 KEAP1-CUL3-RBX1. In seguito a stress ossidativo o elettrofilo, KEAP1 viene inibito, consentendo l'accumulo di NRF2, la sua traslocazione nel nucleo, l'eterodimerizzazione con piccole proteine Maf e l'attivazione della trascrizione dei geni bersaglio. Riferimenti correlati: PMID:11035812, PMID:15601839, PMID:29018201, PMID:19489739, PMID:29590092
• Anche l'autofagia selettiva attiva NRF2: il recettore autofagico SQSTM1/p62 interagisce con KEAP1, lo sequestra e porta all'inattivazione di KEAP1, promuovendo così l'accumulo nucleare di NRF2 e l'espressione di geni citoprotettivi. Riferimenti correlati: PMID:20452972
• Durante la risposta alle protee non ripiegate (UPR), NRF2 viene attivato e contribuisce all'omeostasi redox e alla sopravvivenza cellulare in condizioni di stress del reticolo endoplasmatico.
• NRF2 sopprime l'infiammazione mediata dai macrofagi bloccando la trascrizione delle citochine proinfiammatorie e inibendo il reclutamento della RNA polimerasi II vicino ai geni proinfiammatori, indipendentemente dal motivo di legame canonico di NRF2 e dai livelli di ROS.
• NRF2 limita l'infezione virale: reprime la percezione del DNA citosolico antivirale sopprimendo l'espressione di STING1 e inibisce la replicazione di diversi virus patogeni (ad esempio SARS-CoV-2, HSV-1, Vaccinia, Zika) tramite un meccanismo indipendente dall'interferone di tipo I. Riferimenti correlati: PMID:30158636, PMID:33009401
• NRF2 è ampiamente espresso, con i livelli più alti nel muscolo adulto, nel rene, nel polmone, nel fegato e nel muscolo fetale. Si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo, con una dinamica di shuttling in risposta ai segnali cellulari.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Questo anticorpo policlonale è stato prodotto contro una proteina ricombinante corrispondente agli amminoacidi 366-605 di NRF2 umano, indirizzata alla regione C-terminale. Può rilevare sia le forme totali che quelle modificate; si consiglia di verificare la specificità nel proprio sistema sperimentale utilizzando controlli di knockdown o knockout.
• Per il Western blotting è prevista una banda intorno ai 68 kDa. Modifiche post-traduzionali, come la fosforilazione o l'ubiquitinazione, possono causare spostamenti della banda; ottimizzare i controlli di caricamento e i reagenti di rilevazione.
• Nell'IHC-P, i passaggi di recupero dell'antigene e di bloccaggio sono fondamentali. Utilizzare tessuti di controllo positivo come fegato o rene, che esprimono alti livelli di NRF2.
• Per IF/ICC, le condizioni di permeabilizzazione e fissazione devono essere ottimizzate; la traslocazione nucleare di NRF2 in condizioni di stress ossidativo può essere valutata confrontando le cellule trattate e non trattate.
• Le applicazioni ELISA possono comportare l'abbinamento con un anticorpo secondario adatto o l'utilizzo dell'anticorpo come parte di una coppia sandwich; convalidare con proteine ricombinanti o lisati cellulari.

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