Anticorpo policlonale di coniglio anti-NRF2 per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - Q16236

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di NRF2

• NRF2 è un fattore di trascrizione che si lega agli elementi di risposta agli antiossidanti (ARE) nei promotori dei geni citoprotettivi (ad esempio, gli enzimi detossificanti di fase 2) per neutralizzare gli elettrofili reattivi, svolgendo un ruolo centrale nell'omeostasi redox cellulare. Riferimenti correlati: PMID:11035812, PMID:19489739, PMID:29018201

• In condizioni basali, NRF2 viene ubiquitinato e degradato nel citoplasma attraverso il complesso ligasi E3 dell'ubiquitina KEAP1-CUL3-RBX1; lo stress elettrofilo inattiva il complesso, determinando la stabilizzazione di NRF2, la traslocazione nel nucleo, l'eterodimerizzazione con le proteine Maf piccole e la trascrizione dipendente dagli ARE. Riferimenti correlati: PMID:11035812, PMID:15601839, PMID:19489739, PMID:29590092

• Anche l'autofagia selettiva attiva NRF2 attraverso l'interazione KEAP1-SQSTM1/p62, promuovendo l'accumulo nucleare e l'espressione dei geni citoprotettivi. Riferimenti correlati: PMID:20452972

• Durante la risposta alle proteine mal ripiegate (UPR), NRF2 contribuisce all'omeostasi redox e alla sopravvivenza cellulare (per similarità).

• NRF2 è un regolatore critico dell'immunità innata: sopprime le risposte infiammatorie dei macrofagi bloccando la trascrizione delle citochine pro-infiammatorie e inibendo il reclutamento della RNA Pol II nei promotori dei geni pro-infiammatori, indipendentemente dai motivi ARE e dai livelli di ROS (per similarità).

• NRF2 reprime il rilevamento citosolico del DNA antivirale riducendo l'espressione di STING1, diminuendo la risposta agli agonisti di STING1 e aumentando la suscettibilità all'infezione da virus a DNA. Riferimenti correlati: PMID:30158636

• NRF2 limita il rilascio di citochine pro-infiammatorie durante l'infezione da SARS-CoV-2 e inibisce la replicazione di numerosi virus patogeni (ad esempio, HSV-1, HSV-2, Vaccinia, Zika) attraverso un meccanismo indipendente dall'interferone di tipo I. Riferimenti correlati: PMID:33009401

• NRF2 è una proteina di circa 68 kDa ampiamente espressa (può migrare a un peso maggiore a causa di modifiche post-traduzionali), con i livelli più elevati nel muscolo adulto, nei reni, nei polmoni, nel fegato e nel muscolo fetale; la sua attività è modulata da fosforilazione, acetilazione, ubiquitinazione e glicazione.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 243–400, includendo la regione basica e il dominio a cerniera di leucine; si consideri che questa regione può migliorare il rilevamento della proteina nativa sia in condizioni denaturanti sia native.
• Per il Western blot, è prevista una banda intorno a 68 kDa (la glicosilazione o altre modifiche possono causare un peso molecolare apparente leggermente maggiore); validare utilizzando controlli positivi e negativi appropriati in condizioni riducenti.
• Per l'immunoistochimica (IHC) e l'immunofluorescenza (IF), si raccomandano il recupero antigenico mediante tampone citrato e la permeabilizzazione (per IF); la co-colorazione con un marcatore nucleare può aiutare a confermare la traslocazione nucleare di NRF2 in seguito all'attivazione.
• L'anticorpo presenta reattività crociata con NRF2 di topo e di ratto; verificare le prestazioni nel tessuto o nel lisato cellulare della specie di interesse.
• Per le applicazioni ELISA, valutare l'anticorpo come anticorpo di cattura o di rilevamento nei test immunologici sandwich e confermare la specificità rispetto alla proteina ricombinante o agli estratti cellulari.

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