Anticorpo policlonale di coniglio anti-NSF per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P46459

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di NSF

• Identità della proteina: NSF (proteina di fusione sensibile alla N-etilmaleimmide), nota anche come ATPasi di fusione delle vescicole, SKD2 o SEC18, è un membro della famiglia delle ATPasi AAA codificata dal gene NSF (ID genico: 4905).
• Funzione principale: questa proteina è essenziale per il trasporto mediato dalle vescicole, catalizzando la fusione delle vescicole di trasporto all'interno delle cisterne del Golgi e facilitando il trasporto dal reticolo endoplasmatico all'apparato del Golgi.
• Consegna del carico: NSF sembra agire come una proteina di fusione necessaria per la consegna delle proteine cargo a tutti i compartimenti del Golgi, indipendentemente dall'origine delle vescicole, garantendo un corretto traffico intracellulare.
• Interazione con AMPAR: NSF interagisce con la subunità del recettore AMPA GRIA2, influenzandone il ciclo di membrana e modulando così la plasticità sinaptica (per omologia).
• Localizzazione subcellulare: la proteina risiede prevalentemente nel citoplasma, in accordo con il suo ruolo negli eventi di fusione delle membrane.
• Proprietà principali e associazioni patologiche: NSF presenta attività di legame all'ATP e di idrolasi, richiede il magnesio come cofattore ed è soggetta a fosforilazione e acetilazione. Le mutazioni in NSF sono associate all'encefalopatia dello sviluppo e epilettica (DEE96) e alla disabilità intellettiva.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: l'anticorpo è stato prodotto contro un frammento ricombinante comprendente gli amminoacidi 251-400 di NSF umano, una regione situata nel dominio ATPasico D2. Ciò conferisce specificità per la proteina nativa.
• Western blotting: per il WB, è attesa una banda intorno a 83 kDa corrispondente a NSF endogena. Ottimizzare le condizioni di bloccaggio e rilevazione in base al tipo di campione (lisati umani, murini o di ratto).
• Immunofluorescenza/Immunocitochimica: nella IF/ICC, NSF dovrebbe mostrare una colorazione citoplasmatica. È necessaria la permeabilizzazione; utilizzare metodi di fissazione appropriati per preservare gli epitopi.
• Immunoprecipitazione: la natura policlonale consente una cattura efficiente dei complessi nativi di NSF. Validare l'efficienza dell'IP nel proprio sistema e valutare il cross-linking, se necessario.
• ELISA: l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevazione; eseguire titolazioni a scacchiera per determinare le concentrazioni ottimali di rivestimento e rilevazione.
• Considerazioni generali: essendo un anticorpo policlonale di coniglio, riconosce più epitopi, riducendo il rischio di perdita del segnale dovuta al mascheramento di un singolo epitopo. Includere sempre controlli positivi e negativi specifici per le proprie condizioni sperimentali.

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