Anticorpo policlonale di coniglio anti-OTUB1 per WB, IF/ICC, ELISA - Q96FW1

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di OTUB1

• OTUB1 è un enzima deubiquitinante che idrolizza specificamente le catene di poliubiquitina legate tramite 'Lys-48', svolgendo un ruolo fondamentale nel turnover e nella degradazione delle proteine (PubMed:12401499, 12704427, 14661020). Riferimenti correlati: PMID:12401499 PMID:12704427 PMID:14661020
• Il gene codifica due isoforme tramite splicing alternativo: l'isoforma 1 (ubiquitaria) destabilizza RNF128 per prevenire l'anergia delle cellule T, mentre l'isoforma 2 (specifica del tessuto linfoide) stabilizza RNF128 e promuove l'anergia (PubMed:14661020). Riferimenti correlati: PMID:14661020
• Oltre alla sua attività catalitica, OTUB1 agisce in modo non catalitico nella riparazione dei danni al DNA legando l'ubiquitina libera e inibendo UBE2N/UBC13, limitando così l'ubiquitinazione degli istoni legata tramite 'Lys-63' mediata da RNF168 (PubMed:20725033, 22325355). Riferimenti correlati: PMID:20725033 PMID:22325355
• OTUB1 deubiquitina il recettore alfa degli estrogeni (ESR1) e può rimuovere i coniugati di NEDD8, sebbene con un'efficienza inferiore rispetto all'ubiquitina legata tramite 'Lys-48' (PubMed:19383985, 18954305, 23827681). Riferimenti correlati: PMID:19383985 PMID:18954305 PMID:23827681
• La fosforilazione in Tyr-26 regola l'attività di mTORC1 mediando la deubiquitinazione non catalitica di RPTOR, mentre la deubiquitinazione di DEPTOR dipendente dagli amminoacidi può inibire mTORC1 e mTORC2 (PubMed:29382726, 35927303). Riferimenti correlati: PMID:29382726 PMID:35927303
• La localizzazione subcellulare è prevalentemente citoplasmatica.
• L'isoforma 1 è espressa ubiquamente, mentre l'isoforma 2 è limitata ai tessuti linfoidi (tonsille, linfonodi, milza) e alle cellule mononucleate del sangue periferico.
• OTUB1 appartiene alla famiglia dei tiol-proteasi con dominio OTU ed è classificato come idrolasi; partecipa ai processi immunitari, alla riparazione del DNA e alle vie di coniugazione dell'ubiquitina.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre la regione N-terminale (aa 1-220) di OTUB1 umano, che comprende il dominio OTU; la reattività crociata osservata con topo e ratto suggerisce la conservazione di questa regione.
• Per il western blot, prevedere una banda intorno a 31 kDa; utilizzare controlli positivi appropriati (ad esempio lisati di HeLa o Jurkat) e valutare il knockdown tramite siRNA per confermare la specificità.
• Per l'immunofluorescenza/ICC, eseguire una fissazione e permeabilizzazione standard; prevedere pattern di colorazione citoplasmatica.
• Per le applicazioni ELISA, ottimizzare la concentrazione dell'antigene di coating e le diluizioni dell'anticorpo; l'abbinamento con un anticorpo di rilevazione può supportare lo sviluppo di un saggio sandwich.
• Sebbene sia stato dimostrato che l'anticorpo reagisce con campioni umani, murini e di ratto, verificare sempre le prestazioni nel proprio sistema sperimentale specifico.

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