Anticorpo policlonale anti-p38 MAPK per WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - Q16539

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di p38 MAPK

• La chinasi 14 attivata da mitogeni (MAPK14), comunemente nota come p38 alfa, è una chinasi serina/treonina attivata dallo stress appartenente alla famiglia delle chinasi MAP. Esiste come multiple isoforme tra cui EXIP e MXI2, generate tramite splicing alternativo.

• Dopo l'attivazione da parte di segnali extracellulari come citochine pro-infiammatorie o stress fisico, p38 fosforila le chinasi a valle MSK1/2, che a loro volta regolano i fattori di trascrizione (CREB1, NF-κB, STATs) e l'istone H3 (PubMed:9687510, PubMed:9792677). Attiva anche MK2/3 per controllare la stabilità dell'mRNA tramite ZFP36 ed ELAVL1, e MNK1/2 per fosforilare EIF4E2 per l'inizio della traduzione (PubMed:11154262). Riferimenti correlati: PMID:9687510 PMID:9792677 PMID:11154262

• p38 regola il ricambio proteico fosforilando il ligasi dell'ubiquitina SIAH2 (PubMed:17003045) e l'inibitore dell'apoptosi CFLAR, e può inibire l'autofagia interferendo con il traffico di ATG9 (PubMed:19893488). Riferimenti correlati: PMID:17003045 PMID:19893488

• Nella dinamica dei recettori, p38 guida l'internalizzazione dell'EGFR mediata dalla clatrina tramite fosforilazione dello stesso EGFR e degli effettori RAB5A (PubMed:16932740), e promuove lo shedding del dominio ectoplasmico dei ligandi della famiglia TGF-α attivando la metalloproteasi ADAM17 (PubMed:20188673). Riferimenti correlati: PMID:16932740 PMID:20188673

• Il p38 nucleare fosforila direttamente i fattori di trascrizione tra cui ATF1, ATF2, ATF6, ELK1, TP53/p53 e MEF2A/C (PubMed:10330143, PubMed:9430721, PubMed:9858528), e migliora l'accessibilità di NF-κB ai promotori dei geni infiammatori aumentando la fosforilazione dell'istone H3 a Ser-10. Riferimenti correlati: PMID:10330143 PMID:9430721 PMID:9858528

• p38 contribuisce alla regolazione del ciclo cellulare fosforilando CDC25B/C, portando a un ritardo in G2 dopo la radiazione ultravioletta (PubMed:11333986). È anche essenziale per l'eritropoiesi dello sviluppo e indotta dallo stress attraverso la regolazione dell'espressione del gene EPO (PubMed:10943842). Riferimenti correlati: PMID:11333986 PMID:10943842

• Durante l'infezione, l'EsxA di M. tuberculosis può attivare p38 nelle cellule T, risultando nell'inibizione della produzione di IFN-γ (PubMed:21586573). Riferimenti correlati: PMID:21586573

• p38 si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo. È ampiamente espresso, con i livelli più alti nel cervello, cuore, placenta, pancreas e muscolo scheletrico, e livelli più bassi nel polmone, fegato e rene. Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione e ubiquitinilazione ed è identificato negli studi di proteomica.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi 261–360 di p38 umano) è conservato tra umano, topo e ratto, coerente con la reattività crociata dell'anticorpo. Verificare mediante allineamento delle sequenze prima di estendere ad altre specie.
• Per il Western blotting, utilizzare condizioni denaturanti riducenti e un intervallo iniziale di diluizione dell'anticorpo di 1:500–1:2000; ottimizzare con appropriati controlli positivi (es. HeLa, Jurkat).
• Per IHC-P, potrebbe essere necessario il recupero dell'antigene (es. tampone citrato, pH 6.0); validare la specificità della colorazione con peptide di blocco o controlli tissutali knockout.
• Per IF/ICC, fissare con PFA al 4% e permeabilizzare con Triton X-100 allo 0,1%; colorazione simultanea con marker nucleari/citoplasmatici.
• Per IP, utilizzare 1–2 µg di anticorpo per 500 µg di lisato proteico e catturare con perle di Proteina A/G.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o rilevamento; testare l'abbinamento con un anticorpo monoclonale corrispondente.

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