Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-p38 MAPK per WB, IF/ICC, ELISA - Q16539

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di p38 MAPK (MAPK14)

• MAPK14 è una serina/treonina chinasi che costituisce un componente centrale della via della p38 MAP chinasi. Attivata da citochine pro-infiammatorie e da diversi stressori, regola una vasta rete di substrati a valle (stimati tra 200 e 300 bersagli) per controllare diversi processi cellulari, tra cui l'espressione genica, la stabilità dell'mRNA, la traduzione e il turnover delle proteine.
• Attraverso la fosforilazione delle chinasi a valle MSK1/2 e MAPKAPK2/3/MNK1/2, MAPK14 orchestra la regolazione trascrizionale e post-trascrizionale. MSK1/2 attivano i fattori di trascrizione (CREB1, ATF1, NF‑κB, STAT1/3) e fosforilano direttamente l'istone H3 e HMGN1 per promuovere il rimodellamento della cromatina e l'induzione dei geni a risposta immediata. MAPKAPK2/3 controllano la stabilità dell'mRNA tramite ZFP36 e ELAVL1, mentre MNK1/2 modulano la traduzione attraverso la fosforilazione di eIF4E2. Riferimenti correlati: PMID:9687510, PMID:9792677, PMID:11154262
• MAPK14 fosforila direttamente una gamma di fattori di trascrizione, tra cui TP53/p53 (in cooperazione con la caseina chinasi II), ATF1, ATF2, ELK1 e MEF2C/MEF2A, collegando i segnali di stress alla riprogrammazione trascrizionale. Riferimenti correlati: PMID:10747897, PMID:10330143, PMID:9430721, PMID:9858528
• La chinasi regola la degradazione delle proteine e la dinamica dei recettori di membrana. Fosforila CFLAR per promuovere la degradazione proteasomica, controlla l'attività della ubiquitina ligasi SIAH2 e interferisce con il traffico di ATG9 per modulare l'autofagia. Inoltre, MAPK14 fosforila EGFR e gli effettori di RAB5A per regolare l'endocitosi mediata dalla clatrina e attiva il distacco dell'ectodominio dei ligandi di EGFR dipendente da ADAM17. Riferimenti correlati: PMID:17003045, PMID:19893488, PMID:16932740, PMID:20188673
• MAPK14 partecipa ai punti di controllo del ciclo cellulare e alle risposte al danno del DNA. Fosforila CDC25B e CDC25C, permettendo il legame con 14‑3‑3 e avviando un ritardo in fase G2 dopo irradiazione UV. In seguito al danno del DNA, fosforila TIAR, che viene rilasciato dall'mRNA di GADD45A e previene la degradazione del trascritto. Riferimenti correlati: PMID:11333986, PMID:20932473
• È essenziale per la crescita dei vasi sanguigni nel labirinto placentare e per l'eritropoesi indotta da stress attraverso la regolazione dell'espressione del gene EPO. MAPK14 innesca anche l'attivazione dell'inflammasoma NLRP1 a valle delle collisioni dei ribosomi, portando alla piroptosi. Inoltre, durante l'infezione da M. tuberculosis, l'EsxA batterica fosforila MAPK14 per sopprimere la produzione di IFN‑γ nelle cellule T. Riferimenti correlati: PMID:10943842, PMID:35857590, PMID:21586573
• MAPK14 è espressa in un'ampia gamma di tessuti, con i livelli più alti nel cervello, cuore, placenta, pancreas e muscolo scheletrico; si osserva una espressione più bassa nel polmone, fegato e rene. Si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo. Lo splicing alternativo produce isoforme come MXI2 (attività chinasi ridotta) e EXIP (pro-apoptotico). La proteina subisce molteplici modifiche post-traduzionali tra cui fosforilazione, acetilazione e coniugazione simile all'ubiquitina.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno (peptide sintetico corrispondente agli amminoacidi 100‑200) si trova all'interno di una regione conservata; è quindi attesa una reattività crociata con MAPK14 di topo e ratto. Validare la reattività in lisati cellulari o tissutali specifici per specie prima dell'uso di routine.
• Per il western blot, si consiglia di utilizzare estratti di cellule intere stressate rispetto a cellule a riposo per osservare gli spostamenti delle bande fosfo-specifiche. Includere sempre controlli appropriati (ad esempio anticorpi anti-fosfo-p38, inibitori di chinasi) per garantire la specificità del segnale.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, ottimizzare le condizioni di fissazione/permeabilizzazione e confermare pattern di colorazione coerenti con la distribuzione citoplasmatica e nucleare. Si raccomanda la co-colorazione con marcatori di compartimento.
• Per l'ELISA, utilizzare proteina MAPK14 umana ricombinante come standard e validare la linearità della rilevazione. Accoppiare questo anticorpo con un anticorpo di rilevazione adatto per sviluppare un ELISA sandwich sensibile.
• Poiché MAPK14 presenta funzioni indipendenti dall'attività chinasi e multiple isoforme, verificare che la lettura sperimentale rifletta il ruolo specifico che si intende studiare.

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