Anticorpo policlonale Anti-P4HA2 per WB, IF/ICC, ELISA - O15460

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della P4HA2

• La subunità alfa-2 della prolil 4-idrossilasi (P4HA2) è un enzima chiave nella biosintesi del collagene: catalizza l'idrossilazione dei residui di prolina nelle sequenze -Xaa-Pro-Gly- per formare 4-idrossiprolina, un passaggio essenziale per la stabilità e la funzionalità della tripla elica del collagene.
• La P4HA2 è una delle diverse isoforme della subunità alfa che formano complessi eterotetramerici con P4HB (subunità beta) per costituire la prolil 4-idrossilasi attiva; lo splicing alternativo genera diverse varianti di trascritto.
• L'enzima si localizza prevalentemente nel lume del reticolo endoplasmatico, dove avviene la modificazione post-traduzionale dei polipeptidi di collagene neosintetizzati.
• La sua attività catalitica dipende dai cofattori ferro (Fe²⁺), 2-ossoglutarato, ossigeno molecolare e ascorbato (vitamina C), pertanto viene classificata come membro della famiglia delle diossigenasi dipendenti dal 2-ossoglutarato.
• La profilazione dell'espressione tessutale rivela i livelli più alti in cuore, placenta, polmone e pancreas, in linea con i tessuti ricchi di collagene di tipo I e IV.
• Le modificazioni post-traduzionali includono la glicosilazione N-linked; la proteina è inoltre annotata con domini di legame del ferro e dei metalli e i suoi difetti sono associati a varianti patologiche.
• La proteina contiene motivi a ripetizione tetratricopeptidica (TPR), che sono implicati nelle interazioni proteina-proteina e nell'assemblaggio del complesso della prolil 4-idrossilasi.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde ai residui 239-333 della P4HA2 umana, una regione che mostra un'elevata conservazione della sequenza tra i mammiferi; si consiglia di verificare l'allineamento per il vostro organismo modello.
• Per Western blot (WB) è prevista una banda prevista intorno a 61 kDa; utilizzare condizioni riducenti, salvo diverse ottimizzazioni specifiche.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, aspettarsi una colorazione localizzata nel reticolo endoplasmatico; si raccomanda la co-colorazione con un marcatore del RE.
• Per ELISA, standardizzare l'antigene di rivestimento e la diluizione dell'anticorpo nel vostro sistema di analisi; la reattività crociata indica l'utilizzabilità per campioni umani, di topo e di ratto.
• Poiché l'idrossilazione del collagene è un processo dinamico, si consiglia l'uso della rilevazione della P4HA2 negli studi sulla fibrosi, il rimodellamento dello stroma tumorale o le malattie del tessuto connettivo.

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