Anticorpo monoclonale di coniglio anti-PAF1 per WB, IHC-P, ELISA - Q8N7H5

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di PAF1

• Componente centrale del complesso PAF1 (PAF1C), che regola l’allungamento della trascrizione da parte della RNA polimerasi II, le modificazioni degli istoni e la formazione dell’estremità 3' dell’mRNA.
• Il PAF1C si associa al CTD della RNA polimerasi II sia negli stati non fosforilato sia in quelli fosforilati, facilitando il coordinamento tra la trascrizione e i processi co-trascrizionali.
• Promuove la monoubiquitinazione dell’istone H2B K120 (H2BK120ub1) mediante il reclutamento del complesso ubiquitina-ligasi RNF20/40 e stimola la metilazione H3K4me3; queste modificazioni sono essenziali per la trascrizione attiva.
• È necessario per la trascrizione dei geni bersaglio di Hox e Wnt e svolge un ruolo nell’ematopoiesi e nella leucemogenesi attraverso le interazioni con le oncoproteine di fusione KMT2A/MLL1.
• Si localizza nel nucleo, in linea con le sue funzioni di regolazione trascrizionale.
• Presenta attività oncogenica; è implicato nei processi di splicing alternativo, fosforilazione e coniugazione dell’ubiquitina.
• Durante l’infezione da influenza A (H3N2), interagisce con la proteina virale NS1 per modulare la trascrizione dei geni dell’ospite.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L’immunogeno è un peptide sintetico della regione N-terminale (aa 1-100) di PAF1 umano; pertanto, l’anticorpo può rilevare la proteina a lunghezza intera e alcune isoforme. Verificare la specificità per le isoforme nel proprio sistema sperimentale.
• Per il Western blot, si prevede una banda intorno a 60 kDa in condizioni riducenti; includere controlli positivi, come lisati cellulari di HeLa o HEK293.
• La colorazione IHC-P dovrebbe mostrare una localizzazione nucleare; ottimizzare il recupero antigenico e la diluizione dell’anticorpo utilizzando appropriati tessuti di controllo positivi.
• Nell’ELISA, l’immunogeno peptidico può fungere da standard. La reattività crociata con PAF1 di topo e ratto consente l’applicazione in queste specie; confermare le prestazioni nei campioni della specie pertinente.
• Valutare saggi di co-immunoprecipitazione o ChIP se l’anticorpo funziona nell’analisi di complessi proteici nativi, ma convalidare queste applicazioni in modo indipendente.

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