Anticorpo Monoclonale di Coniglio Anti-PAK3 per WB, IHC-P, ELISA - O75914

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di PAK3

• PAK3 è una serina/treonina protein-chinasi appartenente alla famiglia delle chinasi attivate da p21 (PAK).
• Agisce come effettore a valle delle piccole GTPasi CDC42 e RAC1, regolando la dinamica del citoscheletro, la migrazione cellulare e la progressione del ciclo cellulare.
• Nei neuroni, PAK3 svolge un ruolo fondamentale nella morfogenesi delle spine dendritiche, nella formazione delle sinapsi e nella plasticità sinaptica, in parte attraverso la fosforilazione della catena leggera regolatoria della miosina II (MLC) per controllare la contrattilità dell'actomiosina.
• PAK3 è altamente espresso nel sistema nervoso, in particolare nei neuroni postmitotici della corteccia cerebrale e dell'ippocampo in via di sviluppo e postnatale.
• La chinasi viene attivata legandosi a CDC42/RAC1 attivi, determinando un cambiamento conformazionale e l'autofosforilazione su multipli residui di serina/treonina.
• PAK3 fosforila bersagli a valle come MAPK4, MAPK6 e TNNI3/troponina I, collegandola alla polimerizzazione dell'actina F mediata da MAPKAPK5 e alla contrattilità del muscolo cardiaco.
• Subcellularmente, PAK3 localizza prevalentemente nel citoplasma.
• Lo splicing alternativo genera molteplici isoforme; le mutazioni in PAK3 sono associate alla disabilità intellettiva X-linked.

Indicazioni Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente alla regione N-terminale (aa 1-100) di PAK3 umano, il che suggerisce che l'anticorpo riconosca probabilmente un epitopo all'interno di questo dominio, che può essere conservato tra topo e ratto.
• Per Western blot (WB), la banda prevista è di ~62 kDa; si consiglia di utilizzare tessuti neuronali o lisati cellulari (ad esempio cervello, ippocampo) come controlli positivi.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), sono raccomandate sezioni di cervello incluse in paraffina; è necessario ottimizzare metodi appropriati di recupero dell'antigene.
• L'ELISA può essere eseguita con il peptide immunogeno o la proteina ricombinante PAK3; va valutata la reattività crociata con membri correlati della famiglia PAK.
• Poiché PAK3 è espresso sia nel sistema nervoso in via di sviluppo che in quello adulto, può essere necessaria una convalida specifica per stadio di sviluppo.
• Includere sempre controlli negativi appropriati (ad esempio linee cellulari o tessuti knockout) per confermare la specificità.

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