Anticorpo monoclonale di coniglio anti-PARP1 per WB, IF, IHC, ELISA - P09874

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di PARP1

• PARP1 agisce come poli-ADP-ribosiltransferasi, catalizzando il trasferimento di unità di ADP-ribosio da NAD+ alle proteine bersaglio. Questa attività è fondamentale per la riparazione dei danni al DNA e il mantenimento dell'integrità genomica. Riferimenti correlati: PMID:17177976, PMID:18055453, PMID:18172500

• In seguito al riconoscimento di una rottura del filamento di DNA, PARP1 recluta HPF1 per avviare l'ADP-ribosilazione della serina negli istoni (ad esempio, H2B in Ser6 e H3 in Ser10), determinando la decompattazione della cromatina e l'assemblaggio dei complessi di riparazione. Riferimenti correlati: PMID:18172500, PMID:19344625, PMID:17177976

• PARP1 partecipa sia alla riparazione per escissione di basi (BER) sia ai percorsi di riparazione delle rotture a doppio filamento (DSBR). Collabora con TIMELESS per promuovere la ricombinazione omologa mediante poli-ADP-ribosilazione dei fattori di riparazione. Riferimenti correlati: PMID:26344098, PMID:30356214

• Oltre alla riparazione del DNA, PARP1 regola la trascrizione legandosi ai nucleosomi e modificando l'architettura della cromatina in modo simile all'istone H1, reprimendo così l'attività della RNA polimerasi II. Riferimenti correlati: PMID:15607977, PMID:22464733

• PARP1 è un mediatore fondamentale della morte cellulare programmata. Il suo prodotto di clivaggio da parte delle caspasi-3/7 trasloca nel citoplasma, trasportando catene di poli-ADP-ribosio che inducono l'apoptosi dipendente da AIFM1. Riferimenti correlati: PMID:33168626

• A livello subcellulare, PARP1 risiede prevalentemente nel nucleo, nel nucleolo e sui cromosomi. In seguito alla fosforilazione da parte di PRKDC, può trasferirsi nel citoplasma, dove modula le vie dell'immunità innata, come la via cGAS-STING. Riferimenti correlati: PMID:35460603

• PARP1 catalizza la propria auto-poli-ADP-ribosilazione, una modifica regolatoria fondamentale che controlla la sua attività, le interazioni proteiche e il reclutamento presso le lesioni del DNA. Riferimenti correlati: PMID:17396150, PMID:19764761, PMID:24906880

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno si trova tra gli amminoacidi 200–300 di PARP1 umano, una regione che contiene il secondo dito di zinco e parte del dominio BRCT. Si prevede che l'anticorpo monoclonale di coniglio risultante riconosca un epitopo conservato nelle specie reattive elencate (umano, topo, ratto).
• Per il Western blot (WB), dovrebbe essere rilevata una banda predominante a circa 113 kDa. Si consiglia di utilizzare estratti nucleari come fonte del campione e di validare la specificità mediante knockdown di PARP1 mediato da siRNA.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC) e nell'immunoistochimica (IHC-P), si prevedono pattern di colorazione nucleare o cromosomica. Poiché le sezioni incluse in paraffina possono richiedere il recupero antigenico, ottimizzare i protocolli di recupero degli epitopi indotto dal calore a base di citrato o EDTA per il proprio tessuto.
• L'anticorpo è indicato per applicazioni ELISA. Per un ELISA a sandwich, si raccomanda l'abbinamento con un secondo clone diretto contro un epitopo distinto; uno screening interno delle coppie può identificare le combinazioni ottimali di cattura/rilevazione.
• Poiché PARP1 è soggetto a estese modifiche post-traduzionali e a clivaggio, considerare il contesto biologico (ad esempio, induzione del danno al DNA e apoptosi) nell'interpretazione dei risultati. Le forme a lunghezza completa e quelle clivate possono coesistere a seconda delle condizioni di trattamento.

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