Anticorpo Monoclonale Anti-PCK1 (PEPCK-C) per Western Blot ed ELISA - P35558

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di PCK1

• PCK1 (fosfoenolpiruvato carbossichinasi 1) è l'isoforma citosolica di PEPCK, che funge da enzima limitante della velocità nella gluconeogenesi. Catalizza la decarbossilazione reversibile e la fosforilazione dell'ossalacetato a fosfoenolpiruvato, bilanciando i flussi cataplerotici e anaplerotici nel ciclo dell'acido citrico. Riferimenti correlati: PMID:24863970, PMID:26971250, PMID:28216384

• In condizioni di basso glucosio, PCK1 guida la conversione cataplerotica dell'ossalacetato in fosfoenolpiruvato per la gluconeogenesi; in condizioni di alto glucosio, promuove la conversione anaplerotica del fosfoenolpiruvato in ossalacetato. Riferimenti correlati: PMID:301930971

• Oltre alla sua funzione metabolica, la fosforilazione a Ser-90 da parte di AKT1 trasforma PCK1 in una chinasi proteica serinica. Questa attività "moonlighting" (secondaria) della chinasi innesca il translocazione al reticolo endoplasmatico, dove fosforila INSIG1/2 per rilasciare i fattori di trascrizione SREBP e attivare l'espressione dei geni lipogenici. Riferimenti correlati: PMID:32322062

• PCK1 contribuisce all'omeostasi delle cellule T CD8+ di memoria fornendo fosfoenolpiruvato alle vie metaboliche del glicogeno e del fosfato di pentosio (per similarità).

• A livello subcellulare, PCK1 è prevalentemente citosolico, ma a seguito della fosforilazione mediata da AKT, si transloca al reticolo endoplasmatico.

• I principali siti di espressione tissutale includono il fegato, il rene e gli adipociti, riflettendo il suo ruolo centrale nel metabolismo del glucosio e dei lipidi.

• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione, ubiquitinazione e fosforilazione, e strutturalmente PCK1 è classificata come chinasi legante GTP, liasi e decarbossilasi.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è stato generato contro un peptide sintetico che copre gli aminoacidi 523–622 vicino al terminale C, distale dal sito di fosforilazione Ser-90; considerare questo aspetto nella progettazione di esperimenti di rilevamento specifici per fosfo o isoforma.
• Per il Western blot, validare il rilevamento in lisati di fegato/rene umano, murino o di ratto, poiché questi tessuti esprimono alti livelli di PCK1. L'induzione della gluconeogenesi (es. digiuno/trattamento con cAMP) può potenziare il segnale.
• Nell'ELISA, testare l'abbinamento degli anticorpi e la compatibilità con i formati a sandwich; la natura monoclonale garantisce una specificità coerente tra i lotti.
• Dato il peso molecolare previsto di 69 kDa, assicurare un'adeguata risoluzione del gel e condizioni di trasferimento; le modifiche post-traduzionali possono spostare la banda osservata.

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