Anticorpo policlonale anti-PCNA coniglio per WB, IHC-P, ELISA - P12004

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del PCNA

• PCNA è una pinza di scorrimento del DNA che conferisce processività alle DNA polimerasi durante la replicazione del DNA. Riferimenti correlati: PMID:35585232
• Agisce come proteina ausiliaria per la DNA polimerasi delta ed epsilon, migliorando la loro processività durante l'allungamento del filamento leader. Riferimenti correlati: PMID:35585232
• PCNA svolge un ruolo cruciale nella risposta al danno del DNA (DDR) coordinando la replicazione del DNA con le vie di riparazione, fungendo da piattaforma di carico per le proteine DDR. Riferimenti correlati: PMID:24939902
• Le modifiche post-traduzionali del PCNA, inclusa la mono-ubiquitinazione e la poli-ubiquitinazione legata a Lys-63, dettano la scelta delle vie di tolleranza al danno del DNA: la mono-ubiquitinazione recluta le polimerasi di sintesi translesione, mentre la poli-ubiquitinazione innesca la riparazione mediata da ricombinazione priva di errori. Riferimenti correlati: PMID:24695737
• PCNA stimola le attività esonucleasica 3'-5' e 3'-fosfodiesterasica di APEX2, ma non la sua attività endonucleasica AP, e richiede il caricamento sul DNA per questa funzione.
• Localizzato prevalentemente nel nucleo, PCNA è un componente chiave della forcella di replicazione.
• Le mutazioni nel PCNA sono associate a disturbi neurodegenerativi, sordità e nanismo.
• La proteina subisce ampie modifiche post-traduzionali tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione e ubiquitinazione, che regolano le sue diverse funzioni.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde a una regione conservata (aa 162-261) condivisa tra umano, topo e ratto, coerente con la reattività incrociata riportata. Validare la reattività nella matrice del campione specifico se si utilizzano altre specie.
• Per il Western blot, prevedere una banda a circa 29 kDa; l'arricchimento nucleare può migliorare l'intensità del segnale. Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo primario utilizzando una serie di titolazioni (ad esempio, partendo da 1:500–1:2000).
• L'IHC-P può beneficiare del recupero dell'antigene; includere controlli positivi (tessuti proliferativi) e negativi (controllo isotipico) per confermare la specificità.
• L'ELISA può essere impiegato per rilevare o quantificare il PCNA nei lisati cellulari; assicurarsi che i tamponi di rivestimento e le condizioni di blocco siano ottimizzati per il formato del saggio.
• Considerare l'utilizzo di campioni freschi o congelati e la minimizzazione di conservazioni prolungate o cicli ripetuti di congelamento-scongelamento per preservare l'integrità dell'epitopo.

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