Anticorpo policlonale coniglio anti-PCSK9 per WB, IF/ICC, ELISA - Q80W65

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della PCSK9

• La proproteina convertasi subtilisina/chexina tipo 9 (PCSK9), nota anche come NARC-1 o PC9, è una proteasi serinica secretoria appartenente alla famiglia delle proproteine convertasi. Viene sintetizzata come zimogeno e subisce un clivaggio autocatalitico nel reticolo endoplasmatico.
• La PCSK9 è un regolatore cruciale dell'omeostasi del colesterolo plasmatico legandosi ai membri della famiglia dei recettori delle lipoproteine a bassa densità (LDLR, VLDLR, LRP1, LRP8) e promuovendo la loro degradazione intracellulare, riducendo così l'assorbimento del colesterolo LDL.
• Enhances la degradazione epatica del LDLR tramite una via dipendente dalla clatrina, probabilmente impedendo il riciclo del LDLR dagli endosomi alla superficie cellulare o dirigendolo verso i lisosomi, e può anche indurre l'ubiquitinazione del LDLR.
• Oltre al LDLR, la PCSK9 inibisce la degradazione intracellulare dell'apolipoproteina B (APOB) attraverso una via autofagosoma/lisosoma indipendente dal LDLR e partecipa allo smaltimento degli intermedi BACE1 non acetilati nella via secretoria precoce.
• La PCSK9 modula l'assorbimento di Na+ mediato dal canale del sodio epiteliale (ENaC) diminuendo l'espressione di superficie attraverso una degradazione proteasomica potenziata e regola l'apoptosi neuronale tramite la segnalazione anti-apoptotica dipendente da LRP8/APOER2.
• A livello subcellulare, la PCSK9 si localizza nel citoplasma, viene secreta e si associa agli endosomi, ai lisosomi, alla superficie cellulare, al reticolo endoplasmatico e all'apparato di Golgi, riflettendo la sua diversità di traffico e funzionale.
• L'espressione tissutale è prominente negli epatociti, nelle cellule mesenchimali renali, nell'epitelio dell'ileo e del colon intestinale e nei neuroni del telencefalo cerebrale embrionale.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre gli amminoacidi 35–694 della PCSK9 di topo, abbracciando il dominio catalitico e la regione C-terminale; l'anticorpo può riconoscere sia la forma pro a lunghezza intera (~74 kDa) sia la forma matura clivata. Considerare la validazione delle bande rilevate con controlli appropriati.
• Per il Western blotting, utilizzare una SDS-PAGE riducente e prevedere una banda principale vicino a 74 kDa nei lisati di fegato di topo o epatociti; l'anticorpo reagisce incrociatamente con umano e ratto, ma confermare la reattività nella specie target.
• Negli esperimenti IF/ICC, la PCSK9 mostra una distribuzione citoplasmatica punteggiata e perinucleare coerente con i compartimenti ER, Golgi ed endosomiale. È richiesta la permeabilizzazione; ottimizzare la fissazione e la diluizione dell'anticorpo per il tipo di cellula.
• Per le applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o rilevamento per misurare la PCSK9 nei sovranatanti cellulari o nei fluidi biologici. Validare le condizioni del saggio con standard PCSK9 ricombinanti.

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