Anticorpo policlonale Anti-PENK per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P01210

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Proencefalina-A

• La Proencefalina-A (PENK) è una proteina precursore che viene processata proteoliticamente per generare diversi peptidi oppioidi attivi, tra cui Met-enkefalina e Leu-enkefalina, fondamentali per la modulazione della percezione del dolore e delle risposte allo stress.
• Le enkefaline codificate agiscono come ligandi endogeni dei recettori oppioidi, mimando gli effetti dei farmaci oppiacei e svolgendo un ruolo chiave nell'analgesia, nella ricompensa e nella regolazione dello stress.
• Uno dei suoi prodotti di scissione, la Met-enkefalina-Arg-Phe, agisce come un forte agonista del recettore oppioide di tipo Mu (OPRM1) nel nucleo accumbens, determinando una depressione sinaptica a lungo termine del rilascio di glutammato.
• I peptidi derivati da PENK esercitano anche effetti non oppioidi legandosi al recettore MRGPRX1, indurre prurito indipendente dall'istamina e sensazioni nocicettive nei neuroni sensoriali. Riferimenti correlati: PMID:11850634 PMID:28223516 PMID:21593341
• Subcellulare, la proencefalina-A è localizzata nel lume delle vescicole secretorie, come i granuli cromaffini, e viene secreta dopo stimolazione, coerentemente con il suo ruolo di neuropeptide.
• La proteina contiene caratteristiche strutturali tra cui un peptide segnale, più siti di scissione in corrispondenza di residui basici accoppiati e un legame disolfuro, essenziali per il suo processing e la sua secrezione.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre gli amminoacidi 25–267 della proencefalina-A umana, comprendendo la maggior parte della proteina precursore. Questo anticorpo policlonale può riconoscere sia il precursore a lunghezza intera che i suoi frammenti processati.
• Per Western blot (WB), il peso molecolare previsto del precursore a lunghezza intera è 31 kDa; tuttavia, a causa del processing post-traduzionale, si possono osservare più bande corrispondenti ai peptidi contenenti enkefalina. Si raccomanda l'ottimizzazione della percentuale di gel e dei controlli di caricamento.
• Nell'immunistochimica (IHC-P) e nell'immunofluorescenza (IF-P), metodi appropriati di fissazione (ad esempio, PFA al 4%) e di recupero dell'antigene devono essere validati per il tessuto bersaglio, poiché gli antigeni neuropeptidici possono essere sensibili alla fissazione eccessiva.
• La reattività crociata con topo e ratto permette studi traslazionali in queste specie, ma si consiglia la validazione specifica per specie della specificità dell'anticorpo tramite controlli con knockout o peptide bloccante.
• Per ELISA, potrebbe essere necessario l'abbinamento con un anticorpo di rilevamento corrispondente. Gli esperimenti di titolazione devono determinare le concentrazioni ottime di rivestimento e di anticorpo di rilevamento.

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