Anticorpo policlonale anti-PHD2/EGLN1 per IF/ICC, ELISA - Q9GZT9

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PHD2/EGLN1

• PHD2/EGLN1 è un sensore di ossigeno cellulare che funziona come prolil idrossilasi, catalizzando l'idrossilazione delle subunità alfa del fattore inducibile dall'ipossia (HIF) in condizioni normossiche.
• Idrossila specificamente i residui di prolina all'interno dei domini di degradazione dipendente dall'ossigeno (ODD) di HIF1A e HIF2A, segnalandoli per la degradazione proteasomica tramite il complesso di ubiquitinazione von Hippel-Lindau (VHL).
• In condizioni di ipossia, l'attività di PHD2 è ridotta, permettendo alle subunità HIF-alfa di stabilizzarsi, translocare nel nucleo e attivare la trascrizione di geni coinvolti nell'angiogenesi, nell'eritropoiesi e nell'adattamento metabolico.
• PHD2 è la principale prolil idrossilasi HIF in normossia e svolge ruoli critici nell'angiogenesi retinica e cardiaca, nonché in altri processi influenzati dall'ipossia.
• La proteina appartiene alla famiglia EGLN (EGLN1-3) e contiene un dominio prolil idrossilasi insieme a motivi a dito di zinco, contribuendo alle sue funzioni catalitiche e regolatorie.
• Subisce modifiche post-traduzionali tra cui acetilazione, fosforilazione e S-nitrosilazione, che possono modulare la sua attività e stabilità.
• A livello subcellulare, PHD2 si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo, consentendole di rilevare i livelli di ossigeno e interagire con i substrati HIF in più compartimenti.
• Ampiamente espresso con i livelli più alti nel cuore, cervello, polmoni e fegato adulti, nonché nel cervello, cuore, milza e muscolo scheletrico fetale, coerente con il suo ruolo nell'omeostasi sistemica dell'ossigeno.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno consiste in una proteina di fusione ricombinante che copre gli amminoacidi 1–426 di PHD2/EGLN1 umano (full-length). Questo design può consentire il riconoscimento sia delle conformazioni native che denaturate.
• Per IF/ICC, prendere in considerazione l'uso di protocolli appropriati di fissazione e permeabilizzazione, poiché PHD2 è presente sia nei compartimenti citoplasmatici che nucleari. Validare la specificità del segnale utilizzando controlli appropriati (es. knockdown con siRNA o linee cellulari carenti di PHD2).
• Per ELISA, testare una gamma di diluizioni dell'anticorpo e confermare la linearità con la proteina PHD2 ricombinante o lisati cellulari. A causa della regolazione dipendente dall'ossigeno dell'espressione di PHD2, le condizioni di coltura cellulare (normossia vs ipossia) possono influenzare l'abbondanza del bersaglio.
• Se si applica questo anticorpo in altre applicazioni (es. WB, IP), si consiglia la validazione interna. La reattività incrociata con altri membri della famiglia EGLN (EGLN2, EGLN3) dovrebbe essere valutata in base all'omologia di sequenza.

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