Anticorpo policlonale Anti-PHD2/EGLN1 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9GZT9

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PHD2/EGLN1

• PHD2/EGLN1 (Egl nove omologo 1), denominato anche HIF-prolil idrossilasi 2 (HIF-PH2) o PHD2, è un sensore cellulare dell'ossigeno codificato dal gene EGLN1. Appartiene alla famiglia delle prolil idrossilasi EGLN ed è l'isoforma principale che regola la stabilità del fattore indotto dall'ipossia (HIF) in condizioni normossiche.
• In condizioni normali di ossigeno, PHD2 catalizza l'idrossilazione di residui specifici di prolina all'interno dei domini di degradazione dipendente dall'ossigeno (ODD) di HIF-1α e HIF-2α. Questa modificazione post-traduzionale promuove il riconoscimento da parte del complesso E3 ubiquitina ligasi von Hippel-Lindau (VHL), portando alla degradazione proteasomale delle subunità HIFα. Di conseguenza, i programmi trascrizionali mediati da HIF vengono soppressi.
• Durante l'ipossia, l'attività di PHD2 diminuisce, consentendo alle proteine HIFα di accumularsi, dimerizzare con HIF-1β e traslocare nel nucleo per indurre l'espressione di geni coinvolti nell'angiogenesi, eritropoiesi, adattamento metabolico e sopravvivenza cellulare. Questo meccanismo è alla base dell'adattamento cellulare alla ridotta disponibilità di ossigeno.
• PHD2 si localizza prevalentemente nel citoplasma, ma può essere rilevato anche nel nucleo, in linea con il suo ruolo di sensore dell'ossigeno e modificatore delle proteine HIFα in entrambi i compartimenti.
• È ampiamente espresso in tutti i tessuti, con i livelli più alti di mRNA osservati nel muscolo scheletrico, cuore, cervello, rene e ghiandola surrenale (PubMed:11056053; PubMed:12351678). La proteina viene rilevata nei cardiomiociti, cellule endoteliali aortiche e muscolo liscio delle arterie coronarie. Anche i tessuti fetali mostrano un'espressione significativa, in particolare nel cervello, cuore, milza e muscolo scheletrico (PubMed:12788921). Riferimenti correlati: PMID:11056053 PMID:12351678 PMID:12788921
• PHD2 subisce diverse modificazioni post-traduzionali tra cui acetilazione, fosforilazione e S-nitrosilazione, che possono modulare la sua attività o stabilità. Richiede ferro, 2-ossoglutarato e ascorbato (vitamina C) come cofattori per la sua attività di diossigenasi e contiene un dominio a dito di zinco.
• Le mutazioni in EGLN1 sono associate all'eritrocitosi congenita di tipo 3 (ECYT3), evidenziando il suo ruolo fondamentale nella regolazione dell'eritropoietina e nella produzione di globuli rossi.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno utilizzato per produrre questo anticorpo policlonale è una proteina ricombinante che comprende quasi tutta la lunghezza (aa 1-426) di PHD2/EGLN1 umano, corrispondente alla sequenza canonica. Questo progetto può favorire il riconoscimento della proteina endogena in molteplici applicazioni.
• Per applicazioni di Western blotting (WB), dovrebbe essere osservata una banda specifica corrispondente al peso molecolare previsto di circa 46 kDa. Si raccomanda l'ottimizzazione della preparazione dei campioni, della quantità di caricamento e delle condizioni di rilevazione. Possono essere utili controlli positivi derivati da tessuti con elevata espressione di PHD2, come il muscolo scheletrico o il cuore.
• Nell'immunistochimica (IHC-P) e nell'immunofluorescenza (IF/ICC), si consiglia di testare una gamma di metodi di recupero dell'antigene e diluizioni dell'anticorpo. Data la doppia localizzazione citoplasmatica/nucleare di PHD2, i pattern di colorazione devono essere valutati nel contesto dello stato di ossigenazione cellulare. Controlli appropriati di tipo tissutale o di linea cellulare (ad es. normossia vs ipossia) possono aiutare a confermare la specificità.
• Per saggi basati su ELISA, l'anticorpo può essere adatto come reagente di cattura o rilevazione dopo validazione nella matrice di campione pertinente. Gli utenti devono eseguire test di reattività crociata e interferenza secondo i requisiti specifici del proprio protocollo.
• Sebbene questo anticorpo presenti reattività crociata con PHD2/EGLN1 di topo e ratto, si consiglia l'allineamento della sequenza e esperimenti pilota per confermare una reattività equivalente in queste specie per l'applicazione prevista.

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