Anticorpo Policlonale Anti-PHD3 di Coniglio per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9H6Z9

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di PHD3

• PHD3, noto anche come omologo 3 di Egl nine, idrossilasi 3 HIF-prolil (HIF-PH3) e proteina 3 contenente il dominio idrossilasi prolil (PHD3), è codificato dal gene EGLN3 ed è una prolil idrossilasi che media l'idrossilazione dei residui di prolina in proteine bersaglio come PKM, TELO2, ATF4, GPX4 e HIF1A (PubMed:19584355, PubMed:20978507, PubMed:21483450). Riferimenti correlati: PMID:19584355, PMID:20978507, PMID:21483450
• Come sensore cellulare dell'ossigeno, in condizioni normossiche PHD3 catalizza l'idrossilazione di specifici residui di prolina nel fattore alfa inducibile dall'ipossia (HIF1A e HIF2A), indirizzandoli alla degradazione proteasomiale tramite il complesso di von Hippel-Lindau, attenuando così la risposta ipossica (PubMed:11595184, PubMed:12181324). Riferimenti correlati: PMID:11595184, PMID:12181324
• PHD3 agisce come inibitore della ferroptosi idrossilando GPX4, prevenendone la degradazione tramite autofagia mediata da chaperone; questo processo è promosso da PSAT1 che fornisce il substrato 2-ossoglutarato (PubMed:40281343). Riferimenti correlati: PMID:40281343
• Idrossila anche PKM in ipossia, limitando la glicolisi (PubMed:21483450, PubMed:21620138). Riferimenti correlati: PMID:21483450, PMID:21620138
• PHD3 è un regolatore dell'apoptosi: nei cardiomiociti, inibisce l'effetto anti-apoptotico di BCL2 interrompendo il complesso BAX-BCL2 (PubMed:20849813); nei neuroni, ha un effetto pro-apoptotico indotto da NGF regolando l'attività di CASP3 (PubMed:16098468). Riferimenti correlati: PMID:20849813, PMID:16098468
• La proteina è essenziale per la regolazione ipossica dell'infiammazione neutrofila (PubMed:21317538) e svolge un ruolo cruciale nella risposta al danno al DNA idrossilando TELO2, promuovendo la sua interazione con ATR per l'attivazione della via ATR/CHK1/p53 (PubMed:22797300). Riferimenti correlati: PMID:21317538, PMID:22797300
• PHD3 si localizza sia nel nucleo che nel citoplasma ed è ampiamente espresso a bassi livelli, con espressione più elevata nel cuore, polmone, placenta e pancreas adulti (cellule acinose e delle isole), e nella milza, cuore e muscolo scheletrico fetali.
• Parole chiave associate a PHD3 includono apoptosi, citoplasma, diossigenasi, danno al DNA, ferro, legame metallico, nucleo, ossidoreduttasi, identificazione proteomica, proteoma di riferimento, coniugazione Ubl e vitamina C.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente alla regione N-terminale (aa 1-100) di PHD3 umano, che è conservata tra umano, topo e ratto (UniProt Q9H6Z9). L'anticorpo policlonale risultante è previsto riconoscere sia PHD3 nativo che denaturato, adatto per molteplici applicazioni.
• Per il Western blotting (WB), è attesa una banda intorno a 27 kDa. La diluizione ottimale dell'anticorpo dovrebbe essere determinata sperimentalmente, poiché la variabilità da lotto a lotto è intrinseca agli anticorpi policlonali.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P) e immunofluorescenza (IF/ICC), considerare metodi di recupero dell'antigene appropriati per sezioni incluse in paraffina fissate in formalina. Validare la specificità della colorazione in tessuti con espressione nota (es. cuore, polmone, placenta adulti).
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento a seconda del formato del saggio. Testare diverse concentrazioni di rivestimento e condizioni di blocco per il miglior rapporto segnale/rumore.
• La reattività incrociata con topo e ratto è supportata dall'allineamento delle sequenze; tuttavia, si raccomanda la validazione nel sistema di campioni rilevante prima dell'uso su larga scala.
• A causa della natura policlonale, le prestazioni specifiche del lotto possono variare. Includere controlli positivi e negativi appropriati (es. lisati cellulari knockout per PHD3) per confermare la specificità.

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