Anticorpo monoclonale coniglio anti-Fosfo-Akt-T308 per WB, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di AKT (AKT1/AKT2/AKT3)

• AKT1 è una delle tre chinasi proteiche serina/treonina strettamente correlate (AKT1, AKT2, AKT3) che regolano processi critici come il metabolismo, la proliferazione, la sopravvivenza cellulare, la crescita e l'angiogenesi. Riferimenti correlati: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136

• Come nodo centrale nella segnalazione PI3K, AKT fosforila oltre 100 substrati a valle sui residui serina/treonina per mediare gli effetti dell'insulina, dei fattori di crescita e di altri stimoli. Riferimenti correlati: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781

• Nell'omeostasi del glucosio, AKT promuove l'assorbimento di glucosio stimolato dall'insulina tramite il traslocamento SLC2A4/GLUT4 e la sintesi del glicogeno inibendo GSK3A/B; fosforila anche TBC1D4 per innescare il legame 14-3-3 essenziale per il trasporto del glucosio. Riferimenti correlati: PMID:11994271

• AKT guida la sopravvivenza cellulare fosforilando e inibendo substrati pro-apoptotici come MAP3K5, BAD e i fattori di trascrizione FOXO, il che porta alla sequestro citoplasmatico delle proteine FOXO e all'aumento dei geni anti-apoptotici come BCL2 e MCL1 tramite CREB1. Riferimenti correlati: PMID:11154276, PMID:10358075, PMID:9829964, PMID:10926925

• AKT attiva la segnalazione mTORC1 fosforilando TSC2 e altri regolatori (CASTOR1, DEPDC5), controllando così la sintesi proteica e la crescita cellulare. Riferimenti correlati: PMID:12150915, PMID:12172553, PMID:31548394, PMID:33594058

• A livello subcellulare, AKT si trova nel citoplasma, nel nucleo, nella membrana cellulare e nello spazio intermembrana mitocondriale, riflettendo le sue diverse funzioni.

• Negli esseri umani, AKT1 è espresso ubiquitariamente, con forme fosforilate elevate osservate nei tumori della prostata e della mammella, suggerendo ruoti nella progressione del tumore.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico attorno a Thr308 di Akt umano; la fosforilazione a questo residuo è critica per l'attivazione di Akt. Pertanto, l'anticorpo è specifico per la forma fosforilata e non dovrebbe riconoscere Akt non fosforilata.
• Dato che Thr308 è conservata attraverso gli isoforme AKT1, AKT2 e AKT3, ci si aspetta che l'anticorpo cross-reagisca con le corrispondenti forme fosforilate nel topo e nel ratto, come indicato dai dati di reattività crociata.
• Per l'analisi Western blot, utilizzare appropriati inibitori delle fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare la fosforilazione. I pesi molecolari previsti degli isoforme sono ~48-55 kDa; confermare la specificità della banda con controlli positivi e negativi (es. cellule stimolate con insulina vs non trattate).
• Le applicazioni ELISA possono essere adatte per catturare o rilevare fosfo-Akt nei lisati cellulari; ottimizzare le condizioni di rivestimento e rilevazione per la matrice specifica.
• Dato che la fosforilazione T308 è dinamica, includere appropriati controlli sperimentali per valutare l'attivazione della via di segnalazione (es. trattamento con inibitore PI3K).

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