Anticorpo policlonale rabbit Anti-Fosfo-AKT1 (Ser473) per WB, ELISA - P31749

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di AKT1

• AKT1 (serina/treonina proteina chinasi RAC-alfa, anche nota come PKBα) è una serina/treonina proteina chinasi appartenente alla famiglia AKT, che nell'uomo comprende tre isoforme strettamente correlate (AKT1, AKT2, AKT3) che controllano il metabolismo, la proliferazione, la sopravvivenza, la crescita e l'angiogenesi. Riferimenti correlati: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136

• Agisce a valle di PI3K e trasduce i segnali da insulina, IGF1, EGF e PDGF; fosforila oltre 100 bersagli a valle, tra cui GSK3, TSC2, i fattori di trascrizione FOXO e le componenti della via mTORC1, coordinando così il metabolismo del glucosio, la sintesi proteica e l'espressione genica. Riferimenti correlati: PMID:12176338, PMID:12964941, PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781

• La fosforilazione di TSC2 alla Ser939 e alla Thr1462 da parte di AKT1 rimuove l'inibizione di mTORC1, promuovendo la crescita cellulare e la sintesi proteica; al contrario, AKT1 fosforila e inibisce GSK3α/β per promuovere la sintesi di glicogeno e la progressione del ciclo cellulare. Riferimenti correlati: PMID:12150915, PMID:12172553

• AKT1 promuove la sopravvivenza cellulare fosforilando e inattivando proteine pro-apoptotiche come BAD (Ser136) e MAP3K5/ASK1 (Ser83), e attivando CREB1 per sovraregolare le proteine anti-apoptotiche BCL2 e MCL1. Riferimenti correlati: PMID:10926925, PMID:11154276, PMID:9829964

• Regola la dinamica del citoscheletro e la migrazione cellulare fosforilando substrati come la palladina (PALLD) e SPATA13, influenzando il turnover delle adesioni e la motilità. Riferimenti correlati: PMID:20471940, PMID:19934221

• AKT1 si localizza nel citoplasma, nel nucleo, nella membrana plasmatica e nello spazio intermembrana mitocondriale. È espressa in modo ubiquitario e si osservano livelli elevati di fosfo-Ser473 nei tumori della prostata e della mammella, collegandola alla segnalazione oncogena.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'anticorpo è prodotto contro un peptide sintetico fosforilato corrispondente ai residui intorno alla Ser473 di Akt1 umano; si consiglia di utilizzare lisati trattati con fosfatasi o un anticorpo anti-AKT1 non fosforilato come controllo negativo per verificare la specificità per la forma fosforilata.
• In WB è attesa una singola banda a ~56 kDa; utilizzare controlli positivi appropriati (es. lisati di cellule stimolate con insulina o EGF) e ottimizzare le quantità di caricamento e i tempi di esposizione.
• Per ELISA, il rivestimento della piastra con peptide fosforilato e peptide non fosforilato può aiutare a valutare il legame fosfo-specifico; includere passaggi di blocco e lavaggio per ridurre il background aspecifico.
• La reattività crociata è indicata per uomo, topo e ratto; tuttavia si raccomanda la validazione nella matrice di campione rilevante per ogni specie.
• Poiché l'anticorpo riconosce la forma fosforilata di AKT1, può anche rilevare altre isoforme di AKT (AKT2, AKT3) se l'epitopo è conservato; confermare la specificità con modelli di knockdown o knockout specifici per l'isoforma se necessario.

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