Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-BRD4 (Ser1070) per WB, ELISA - O60885

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di BRD4

• BRD4 (Proteina 4 contenente il dominio bromo), noto anche come HUNK1, è un lettore della cromatina che si lega agli istoni acetilati e trasmette la memoria epigenetica attraverso le divisioni cellulari. Rimane associato alla cromatina durante tutto il ciclo cellulare, aiutando a mantenere la struttura della cromatina e consentendo la trascrizione post-mitotica (PubMed:20871596, PubMed:23086925, PubMed:23317504, PubMed:22334664, PubMed:23589332). Riferimenti correlati: PMID:20871596 PMID:23086925 PMID:23317504 PMID:22334664 PMID:23589332

• Recluta il complesso P-TEFb ai promotori e agli enhancer, promuovendo la fosforilazione del dominio C-terminale (CTD) della RNA polimerasi II a Ser2 e facilitando l'allungamento trascrizionale. JMJD6 collabora con BRD4 per spostare i regolatori negativi come HEXIM1 e 7SK snRNA (PubMed:16109376, PubMed:16109377, PubMed:19596240). Riferimenti correlati: PMID:16109376 PMID:16109377 PMID:19596240

• BRD4 riconosce RELA acetilata, portando al reclutamento di P-TEFb e all'attivazione della segnalazione NF-kappa-B (PubMed:19103749). Riferimenti correlati: PMID:19103749

• Seguendo la fosforilazione da parte di CK2, BRD4 viene reclutato ai promotori bersaglio di p53/TP53 e regola la trascrizione mediata da p53 (PubMed:23317504). Riferimenti correlati: PMID:23317504

• Nella risposta al danno al DNA, BRD4 funge da isolatore cromatinico reclutando il complesso condensina-2 agli istoni acetilati, limitando la diffusione della fosforilazione H2AX e modulando la segnalazione.

• BRD4 è localizzato prevalentemente nel nucleo e nei cromosomi, coerentemente con il suo ruolo nella regolazione della cromatina. È espresso ubiquitariamente e subisce varie modifiche post-traduzionali, inclusa la fosforilazione e l'acetilazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per mantenere la fosforilazione di BRD4 a Ser1070 durante la preparazione del campione, aggiungere inibitori delle delle fosfatasi ai tamponi di lisi ed evitare incubazioni prolungate a temperatura ambiente.
• Per il western blotting (WB), il peso molecolare previsto di BRD4 è 152 kDa; confermare l'identità della banda usando appropriati controlli positivi e negativi (es, lisati trattati con fosfatasi).
• Gli esperimenti ELISA dovrebbero includere controlli peptidici fosforilati e non fosforilati per verificare la specificità dell'anticorpo per l'epitopo fosforilato.
• Ottimizzare empiricamente la diluizione dell'anticorpo e le condizioni di incubazione; le diluizioni iniziali tipiche per WB variano da 1:500 a 1:2000.

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