Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-CDK2-T160 per WB, IHC-P, ELISA - P24941

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CDK2

• CDK2 (Chinasi dipendente dalla ciclina 2) è una chinasi proteina serina/treonina che svolge un ruolo centrale nella regolazione del ciclo cellulare, in particolare nella transizione G1-S e nella progressione della fase S. Fosforila substrati critici come RB1, p53/TP53, NPM1 e BRCA2 per promuovere la sintesi del DNA, la duplicazione del centrosoma e i programmi di trascrizione. CDK2 è essenziale per la meiosi ma dispensabile per la mitosi. Riferimenti correlati: PMID:10499802 PMID:10884347 PMID:10995386 PMID:11051553

• L'attività chinasica del CDK2 è strettamente controllata dal legame con le cicline e dalla fosforilazione. I complessi Ciclina E/CDK2 guidano la transizione G1-S, mentre i complessi Ciclina A/CDK2 spingono la progressione S-G2. L'attivazione completa richiede la fosforilazione in Thr-160 all'interno del T-loop da parte del complesso chinasi attivante CDK (CAK). Riferimenti correlati: PMID:18372919 PMID:19238148 PMID:19561645

• CDK2 si localizza in più compartimenti subcellulari, tra cui il nucleo, il centrosoma, il corpo di Cajal, il citoplasma, il citoscheletro e l'endosoma, riflettendo le sue diverse funzioni nel coordinamento del ciclo cellulare, nella riparazione del DNA e nella segnalazione.

• CDK2 partecipa alle vie di risposta e riparazione dei danni al DNA. Fosforila BRCA2 per regolare la riparazione per ricombinazione omologa e fosforila NBN per influenzare la manutenzione dei telomeri, contribuendo così alla stabilità genomica. Riferimenti correlati: PMID:15800615 PMID:20195506 PMID:21319273 PMID:28216226

• CDK2 fosforila la metiltransferasi degli istoni EZH2, promuovendo la manutenzione dei marchi epigenetici H3K27me3 e il silenziamento genico. Questo evidenzia il ruolo di CDK2 nella regolazione epigenetica. Riferimenti correlati: PMID:20935635

• Le modifiche post-traduzionali di CDK2, come la fosforilazione, l'acetilazione e la S-nitrosilazione, modulano la sua attività e stabilità. CDK2 è un membro della superfamiglia delle chinasi proteiche, caratterizzato da domini di legame dell'ATP e dei metalli. Riferimenti correlati: PMID:20079829

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo riconosce specificamente il CDK2 fosforilato in Thr-160. Per preservare la fosforilazione durante la preparazione del campione, includere inibitori delle fosfatasi nei tamponi di lisi ed evitare incubazioni prolungate a temperatura ambiente.
• Per il Western blotting, si prevedono bande a circa 30 kDa e 34 kDa (corrispondenti alle isoforme CDK2 o agli spostamenti indotti dalla fosforilazione). Utilizzare lisati trattati con λ-fosfatasi come controllo negativo ed estratti di cellule arricchite in fase S come controllo positivo.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), i metodi di recupero dell'antigene dovrebbero essere ottimizzati per mantenere gli epitopi fosforilati. Validare la specificità della colorazione confrontandola con la colorazione del CDK2 totale o utilizzando saggi di competizione peptidica.
• Per le applicazioni ELISA, l'anticorpo può fungere da reagente di cattura o rilevamento; titolare con attenzione e confermare la linearità per il rilevamento quantitativo del fosfo-CDK2-T160.

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