Anticorpo Monoclonale Anti-Fosfo-Chk1 (S280) per WB, ELISA - O14757

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Serina/treonina-chinasi Chk1

• La serina/treonina-chinasi Chk1 (CHEK1) è una chinasi critica per l'arresto del ciclo cellulare mediato da checkpoint e la riparazione del DNA. Un isoforma ottenuta da splicing alternativo (isoforma 2) agisce come repressore endogeno dell'isoforma 1, antagonizzandone la funzione.
• Richiesta per la risposta al danno al DNA: riconosce la sequenza consenso del substrato [R-X-X-S/T] e fosforila CDC25A, CDC25B e CDC25C, creando siti di legame per 14-3-3 che inibiscono queste fosfatasi e/o promuovono la degradazione di CDC25A, risultando nella fosforilazione inibitoria in tirosina dei complessi CDK-ciclina e nell'arresto del ciclo cellulare. Riferimenti correlati: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511
• Fosforila RAD51 al Thr-309, promuovendone il rilascio da BRCA2 e aumentando l'associazione alla cromatina, facilitando così la riparazione del DNA per ricombinazione omologa. Riferimenti correlati: PMID:15665856
• Fosforila più siti C-terminali di TP53, aumentandone l'acetilazione e l'attivazione per promuovere l'arresto del ciclo cellulare e sopprimere la proliferazione. Riferimenti correlati: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Fosforila anche altri substrati, tra cui FANCE (riparazione dei cross-link del DNA), TLK1 (assemblaggio della cromatina), l'istone H3.1 al Thr-11 (silenziamento genico epigenetico), RB1 (promuovendo l'interazione con E2F), SPRTN (reclutamento cromatinico) e PABIR1/FAM122A (regolazione del checkpoint G2/M). Riferimenti correlati: PMID:17296736 PMID:12660173 PMID:12955071 PMID:17380128 PMID:31316063 PMID:33108758
• La localizzazione subcellulare include il nucleo, i cromosomi, il citoplasma e i centrosomi, coerente con i suoi ruoli nella segnalazione del checkpoint, nella riparazione del DNA e nella regolazione del ciclo cellulare.
• Esressa in modo ubiquitario, con i livelli più alti nel timo, testicolo, intestino tenue e colon.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato circostante la Ser280 della Chk1 umana. L'anticorpo è progettato per riconoscere specificamente la forma fosforilata. Convalidare la specificità confrontando i segnali in campioni trattati con fosfatasi vs. non trattati o utilizzando un peptide di bloccaggio non fosforilato.
• Per il Western blot, si raccomanda l'uso di appropriati inibitori delle fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare il segnale di fosforilazione. È attesa una banda vicino a 54 kDa per Chk1.
• In ELISA, considerare l'uso di un peptide fosforilato legato alla piastra e un controllo con peptide non fosforilato per confermare la specificità per la fosforilazione.
• La fosforilazione di Chk1 alla Ser280 è indotta dal danno al DNA. Stimolare le cellule con agenti dannosi per il DNA (ad es. UV, idrossiurea) può migliorare il rilevamento in linee cellulari rilevanti.

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