Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-Fosfo-Chk1 (S317) per WB, ELISA - O14757

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Chk1

• Serina/treonina chinasi proteica (gene CHEK1) che esiste in due isoforme: la chinasi a lunghezza intera (isoforma 1) e una isoforma repressore endogena che antagonizza la CHK1 per promuovere la transizione da S a G2/M.
• Necessaria per l'arresto del ciclo cellulare mediato dai checkpoint e l'attivazione della riparzione del DNA in risposta a danni al DNA o DNA non replicato. Riferimenti correlati: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Fosforila le fosfatasi della famiglia CDC25 (CDC25A, CDC25B, CDC25C) per creare siti di legame 14-3-3 e inibire la loro attività, prevenendo così l'attivazione CDK-ciclina e bloccando la progressione del ciclo cellulare. Riferimenti correlati: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511
• Marca la CDC25A per la degradazione proteasomiale fosforilando residui di serina multipli (Ser-76, Ser-124, Ser-178, Ser-279, Ser-293), con Ser-76 che prepara per la poliubiquitinazione mediata da NEK11. Riferimenti correlati: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:19734889 PMID:20090422 PMID:9278511
• Fosforila RAD51 a Thr-309, promuovendo il suo rilascio da BRCA2 e migliorando l'associazione alla cromatina per facilitare la riparazione per ricombinazione omologa. Riferimenti correlati: PMID:15665856
• Fosforila TP53 in siti C-terminali multipli, promuovendo l'acetilazione, l'attivazione trascrizionale e l'arresto del ciclo cellulare. Riferimenti correlati: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Inoltre fosforila FANCE (riparazione dei cross-link del DNA), TLK1 (assemblaggio della cromatina) e altri substrati per coordinare la manutenzione del genoma. Riferimenti correlati: PMID:17296736 PMID:12660173 PMID:12955071
• Si localizza nel nucleo, cromosomi, citoplasma e centrosoma; espressa ubiquitariamente con i livelli più alti nel timo, testicolo, intestino tenue e colon.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per confermare la specificità fosfo-specifica, trattare i campioni con lambda fosfatasi o includere un controllo di blocco con peptide non fosforilato.
• Per il Western blot, stimolare le cellule con agenti dannosi per il DNA (es. etoposide, UV o idrossiurea) per indurre la fosforilazione della Chk1 a S317 e migliorare il rilevamento del segnale.
• Validare le prestazioni dell'anticorpo nelle linee cellulari umane e nei sistemi di saggio pertinenti, poiché la reattività incrociata con altre specie non è stata documentata.
• Per le applicazioni ELISA, utilizzare controlli positivi e negativi appropriati per garantire la specificità per l'epitopo fosforilato.
• Considerare l'ottimizzazione della diluizione dell'anticorpo e delle condizioni di incubazione per il proprio setup sperimentale specifico.

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