Anticorpo policlonale rabbit Anti-Fosfo-Chk2-T68 per WB, ELISA - O96017

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Chk2

• La Serina/treonina-protein chinasi Chk2 (CHEK2, CDS1, omologo RAD53) svolge un ruolo critico nell'arresto del ciclo cellulare mediato da checkpoint, nella riparazione del DNA e nell'apoptosi in risposta alle rotture doppie del filamento di DNA.
• Agisce come oncosoppressore; inoltre regola negativamente la progressione del ciclo cellulare durante i cicli non perturbati e può contribuire all'instabilità cromosomica in sua assenza.
• Dopo l'attivazione, fosforila numerosi effettori preferenzialmente sulla sequenza consenso [L-X-R-X-X-S/T].
  Riferimenti correlati: PMID:37943659
• Regola l'arresto del checkpoint del ciclo cellulare fosforilando e inibendo le fosfatasi CDC25A, CDC25B e CDC25C, portando alla fosforilazione tirosinica inibitoria dei complessi CDK-ciclina.
• Promuove la riparazione del DNA tramite fosforilazione di BRCA2 (aumentando l'associazione di RAD51 alla cromatina) e stimolando la trascrizione dei geni per la riparazione del DNA tramite FOXM1.
• Media l'apoptosi tramite fosforilazione di p53/TP53 alla Serina-20, MDM4 e PML, nonché tramite la trascrizione di geni pro-apoptotici dipendente da E2F1.
• Sotto stress ossidativo, fosforila TRIM32 alla Serina-55 per promuovere l'ubiquitinazione di ATG7 e l'assemblaggio dell'autofagia.
  Riferimenti correlati: PMID:37943659
• Promuove l'associazione CCAR2-SIRT1 ed è richiesto per l'inibizione di SIRT1 mediata da CCAR2.
  Riferimenti correlati: PMID:25361978
• Si localizza prevalentemente nel nucleo (nucleoplasma, corpi PML); è altamente espresso nel testicolo, nella milza, nel colon e nei leucociti del sangue periferico, con espressione più bassa in altri tessuti.
• Contiene domini chinasi, di legame all'ATP e di legame ai nucleotidi; è classificato come fosfoproteina con ruoli nella mitosi, nella regolazione della trascrizione e nell'interazione ospite-virus.

Indicazioni Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico intorno alla T68, che indica specificità per la forma fosforilata; utilizzare inibitori delle fosfatasi appropriati durante la preparazione del campione per preservare i segnali di fosforilazione.
• Per Western blot, si consiglia di stimolare le cellule con agenti dannosi per il DNA (ad es. etoposide, irradiazione) per indurre la fosforilazione della Chk2 prima della preparazione del lisato.
• Convalidare l'anticorpo su campioni umani; potrebbero comparire bande di fondo, pertanto è consigliabile ottimizzare le condizioni di caricamento e rilevazione.
• Per ELISA, il peptide fosforilato può essere utilizzato come antigene di rivestimento per confermare la specificità; si raccomandano controlli negativi con peptide non fosforilato.
• In WB si dovrebbe osservare una banda attesa vicino a 61 kDa; bande aggiuntive possono riflettere varianti di splicing o modifiche post-traduzionali.

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